手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

抗原致敏大鼠离体肺片VCAM-1表达及药物调节作用

杨晓红

  背景:支气管哮喘是由嗜酸细胞,肥大细胞和T淋巴细胞等多种炎症细胞参与的气道慢性炎症,嗜酸细胞浸润和气道高反应性为主要特征。其中嗜酸细胞浸润和激活在哮喘发病机制中起重要作用。当哮喘患者被抗原激发后8-48小时后,嗜酸细胞就聚集浸润在肺局部。通过释放多种毒性蛋白,如主要碱基蛋白(MBP)和嗜酸细胞阳离子(ECP),参与引起支气管哮喘的病理改变如气道高反应性、血浆蛋白渗出、腺体分泌亢进和上皮细胞破坏。支气管哮喘的严重程度和在肺部聚集浸润的嗜酸细胞的数目呈正相关,抑制嗜酸细胞在肺部的聚集能够减轻支气管哮喘患者的症状,抑制病情发展。已知有多种机制参与了哮喘气道炎症嗜酸性粒细胞的趋化、浸润、激活及释放炎症介等。近几年来很多实验研究发现细胞粘附分子特别其中的VCAM-1/VLA-4系统与过敏性炎症的炎症细胞特别嗜酸细胞的粘附、跨内皮移动、浸润有密切关切。一般认为肺部VCAM-1的表达上调是由多种因素调控的,在抗原激发后的比较短的时间内表达上调,参与白细胞和内皮细胞的牢固粘附。甚至有部分实验报道正常情况时内皮细胞只表达少量的ICAM-1,而没有VCAM-1的表达。但是我们在整体人鼠哮喘模型中,发现VCAM-1在正常的人鼠肺部就有一定的表达,在抗原致敏后表达即增加,抗原攻击不能进一步增加其表达。因此对哮喘时VCAM-1的表达机制值得耶江大学颐土学位论文进一步的探讨和研究.日的:在离体肺片水平上进一步观察致域大鼠肺VCAM·I的表达情况,对鳖体动物实验的结果进行进一步的补充和证实,进一步验证VCAM.!表达I升高是泛成致鳗状奋的一种基本改变,而抗原攻击不能进一步上瞩VCAM-l的表达.同时观亲抗炎症药物糖皮质激蠢地塞米松、R三烯受体桔抗剂ONO-10781 Pranluk8St,4-氧-8-【对-(4-苯丁氧基)苯甲田氦基卜2-(5-四哇基)-4H-卜苯并毗哺半水台物}和速激肽NK-l 受体桔抗剂SR-140333《(S)-l(2-【3,4-HR苯基-l(3-异丙氧基乙酞基)-赈咬基-3]乙基-l)-4-苯基-I-偶氮二环【2,2,2]辛烷氯化物 I对离体肺片VCA M.l表沾的影响,进一步探讨影响肺部VCAM-!表达的冈紊.方法:用卵白蛋白(OVA,lmghl)致敏SD大鼠后15大,脸主动脉放血取肺纽织,用切片机切成约 500 P m的肺簿片,孵育丁 35切.5“C泅有混合气体门5%O2+5$CO/的 Kreb’s液体中·预孵育 Ih后,加人各种药物或生理盐水(对照),10 min后加OVA (1 ughl)或生理盐水,继续听育3 h,取出肺片保存于-70”C。为检测听育过程中肺片活性,以比色法渊定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性。蛋R免疫印迹法测定不同组别大鼠离体肺薄片的yCAM-1的表达.统计学处理:结果以Z土 s表示,采用SPSS for’indo’s 8.0统计软包,以on e、syA及 卜t6St作差异的显著性分析。间结果:1.致欧大鼠离体防簿片在听育过程中向eb’S t中忑放LDH.在开始第一个小时肺片LDH释放较多且不稳定,但在接下来的二个小时中LDH f放较少.2-浙江大学硕士学垃论文且比牧稳定,而OVA攻击对肺片的活性并未造成有统计意义的影响.2.整体OVA致敏及离体OVA攻击对人鼠肺薄片VCAM-I表达的影响:在我们的实验条件下,未致敏大鼠肺薄片未经OVA攻击对肌钒即可测到有一定员VCAM一衰达(n=8.相对灰度为1.08土0.14).未致敏人鼠离体肺薄片卵白勾蛋白攻击后 VCAM-l的表达(n=8,相对灰应为1.0610.20)与对照纽相比没有增加.致敏大鼠离体肺薄片未经OVA攻击VC^M-!表达(ps,相对灰度为 1.38士 0.ZI)明显增加(Ped.05),大约憎加了 28%.而致敏人鼠离体肺薄片用OVA攻击后VCAM叫表达(n=8,相对灰度为1.54土0.3)与攻击组比较没有统计意义上的差别。3.地塞米松对大鼠肺薄片VCAM.l表达的影响。a.用地塞米松处理时,0.!u mol几的浓应能使米致敏人鼠离体肺闭片VCAM-l表达(同时无 OVA攻击:n=8,相对灰度为0.巴巴士 0.25;同时有 OVA攻击:n—8,相对灰度为0.93土0.13)较对照纽有降低的趋势,但是差别没有统计意义。而 1.0 u mol几的浓度能使肺簿片 V……