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抑制素和bcl-2基因免疫对小鼠繁殖和生长的影响

姜勋平

  用生物分子信息学理论和方法,借助计算机软件分析猪抑制素α亚基的二级结构、疏水性、亲水性和抗原性等理化特征,确定了抑制素α(1-32)和(100~120)区域是两个抗原决定簇。比较猪抑制素α亚基与NR蛋白库已知的蛋白质序列表明,它与人、牛、羊等家畜的抑制素具有较高的同源性,同时也与体内的100多种其它蛋白质具有较高的同源性。用抑制素α亚基全序列构建基因疫苗,可能产生的抗体会与体内其它同源蛋白发生交叉反应。经综合分析,抑制素α(1-32)既具有抑制素的免疫原性,又与体内其它蛋白质没有同源性,它的编码序列是构建抑制素基因疫苗的理想克隆区域。克隆猪抑制素α(1-32)基因,与pET-32c载体的硫氧还蛋白(Thioredoxin)基因重组,表达的融合蛋白分子量约14KD。用最优回归试验设计研究IPTG最佳诱导条件,最大表达量电泳扫描净灰度达38.78%。与NR库同源性分析表明,融合蛋白与体内的硫氧还蛋白等具有很大的同源性,不宜用作抑制素免疫原。用编码抑制素α(1~32)的基因与pcDNA3.1真核表达质粒重组构建抑制素基因疫苗。抑制素基因免疫后重组质粒可以在活体肌细胞内表达,表达产物具有抑制素抗原性,能激活免疫系统产生抑制素抗体,阳性率30%。验证了用计算机确认的抑制素抗原区域是正确的。抑制素抗体阳性小鼠与阴性小鼠的产仔数、初生重和窝重等没有显著差异(p>0.05)。这是国内外首次用基因免疫的方法研究动物繁殖力调控的实验。构建了B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)基因真核表达质粒。用流式细胞仪分析表明,体外转染bcl-2基因重组质粒后,传代细胞比对照组分裂速度快(p<0.01)、凋亡比率较低,G_2/M+S期细胞显著高于对照(P<0.01)。表明构建的bcl-2基因真核表达质粒能在真核细胞中表达;外源Bcl-2基因可以抑制体外培养细胞的凋亡、延长细胞的寿命。bcl-2基因免疫后小鼠生长速度比对照组慢,对睾丸重、卵巢重没有影响。这提示该基因与小鼠生长有关,可以用基因治疗的方法增加小鼠的生长速度;可以将它作为候选基因,研究其对生长的遗传效应。……   
[关键词]:抑制素;bcl-2;基因免疫;繁殖;生长
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:南京农业大学2001年