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心脉神口服液抗实验性动脉粥样硬化作用及其机理研究

覃军

  动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是心血管系统中常见的一种病理现象和过程,也是许多严重危害人类健康的心、脑血管疾病的重要病理基础。寻找有效抗AS的药物一直是备受关注的课题。我院制剂中心生产的心脉神口服液(XinMeiShen oral liquid,XIN-MAI-SHEN)组方为第三军医大学新桥医院何作云教授的祖传验方。主要包含黄芪、何首乌等,并采用新技术加工而成。临床主要用于治疗高脂血症及心绞痛等。对心脉神口服液的初步研究发现其通过降低血脂、抗氧化等作用能减轻实验性AS的形成。本研究在有关心脉神口服液抗AS初步实验研究基础之上,进一步从整体动物及细胞培养两个方面采用多种方法研究心脉神口服液的抗AS作用及并探讨其可能的机理,为进一步拓展心脉神口服液的临床应用提供实验依据。一、材料与方法(一)整体动物实验雄性新西兰兔64只,随机分为5组。正常对照组予正常颗粒饲料,AS模型组(AS组)每日加固醇粉(0.5g/kg),辛伐他汀预防组(辛伐他汀组)和心脉神口服液预防组(XMS预防组)均在喂饲胆固醇粉的同时分别每日予辛伐他汀(5mg/kg)和心脉神口服液(10ml/kg),心脉神口服液治疗组(XMS治疗组)则在喂饲胆固醇粉8周后再给予心脉神口服液(10ml/kg)。分别于实验开始时和第8、12周末测定血脂(总胆固醇、甘油三酯)、一氧化氮、内皮素、血栓素B2、6-酮-前列腺素F1α、超氧化物歧化酶及丙二醛,同时作病理观察(主动脉AS斑块面积测定、光镜及电镜)。(二)细胞培养1.贴块法原代培养兔主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)并建立内皮素-1(ET-1)刺激VSMC增殖模型二.制备含药血清:通过给雄性新西兰兔梯度剂量的心脉神口服液门、20、30ml瓜g\辛伐他汀K、10、15mg/kg)及自来水制备相应的含药血清。3.分别采用MTT法/H*dR掺入试验检测含药血清对平滑肌细胞增殖的影响。4.分别采用免疫细胞化学、原位杂交及RT干CR法检测含药血清对ET习刺激增殖的 VSMC增殖相关原癌基因*-fos、c-myc)表达的影响。二、结果与讨论(一)心脉神口服液对血脂及主动脉AS面积的影晌及意义本实验结果证明心脉神口服液预防性给药能降低高脂血症,并且其作用与辛伐他汀相似;而XMS治疗组的降脂作用不明显。本实验中阳性对照药辛伐他汀组主动脉脂质面积明显减少,XMS预防组主动脉AS斑块面积显著低于同期AS模型组,与辛伐他汀治疗组相近。提示心脉神口服液预防性给药能显著地对抗AS形成。第12周末,XMS治疗组主动脉脂质面积与AS组无显著差异,提示其对已形成的AS的治疗作用不明显和/或可能与给药时间过短有关。高脂血症尤其是血清TC、TG升高是AS发病的重要因素。XMS预防组明显减少主动脉粥样面积,表明心脉神口服液的抗AS作用与其调节血脂有关。(H) 对食饵性AS兔血清SOD、MDA的作用及意义研究证明,AS形成的许多环节与脂质过氧化密切相关,增强抗氧化能力能防止或者减缓AS的进程。本研究XMS预防组和辛伐他汀组均有相似的显著降低MDA作用。表明心脉神口服液及辛伐他汀在高脂条件下具有抗脂质过氧化的药理作用。本研究AS模型组及各个实验组SOD无显著变化,这可能是机体反应性保护的防御机制的表现。在药理研究经常可见到有些药物对正常动物作用不明显,而对病态机体却表现出明显的作用。本实验XMS预防组和辛伐他汀预防组均对SOD无显著影响,是否与上述观点(现象)有关尚不清楚。XMS治疗组对MDA。SOD影响不明显,可能与该组开始治疗时AS病变已较严Vll重和/或治疗时间较短有关。(5) 对对食饵性AS兔叮、NO的作用及意义高胆固醇血症、AS时ET-l释放增多。本实验动态观察XMS预防组与辛伐他汀预防组均有显著降低ET作用,并且这两种药物的作用相似。表明心脉神口服液和辛伐他汀均具有在高脂条件下保护内皮、减少ET释放的作用。本研究动态观察发现实验性AS中期(第8周末)NO无明显变化,至第12周时AS模型组NO明显下降。第8、12周末,XMS预防组和辛伐他汀组NO均较AS升高,但无显著性意义。本研究辛伐他汀组NO改变(升高)不明显,可能与辛伐他汀降低血脂使血粘度下降,导致刺激NO生成的剪切应力下降,最终使NO释放减少;以及辛伐他汀组在给药的同时仍然喂饲高胆固醇,且AS病变逐渐进展,其作用抵消了辛伐他汀促进NO释放有关。本研究XMS预防组未能显著改善NO的机制不清。经过4周给药治疗后,XMS治疗组NO、ET虽分别高于、低于AS模型组,但无显著性意义。结合XMS预防组相应时点AS病变及NO、ET的改变分析,XMS治疗组AS逆转作用不明显可能与病变较重及/或给药时间过短有关。(四)对食饵性AS兔TXBz和 6-keto-PGF;。及其比值的影响及意义在AS发生的损伤学说中,TXAZm 的失衡是AS的发病原因之一。本研究显示,辛伐他汀组对TXBZ、6七 卜PGFIu的影响不?……