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瘢痕疙瘩周围皮肤成纤维细胞生物学活性的实验研究

段红杰

  背景及目的:已有研究表明:瘢痕疙瘩成纤维细胞处于一种高增殖低凋亡的状况,同时存在凋亡相关基因P53及Fas的突变。鉴于瘢痕疙瘩浸润性生长、治疗后易复发及其周围皮肤真皮层增厚等特性,我们推测瘢痕疙瘩周围皮肤中存在异常细胞,这种异常细胞是瘢痕疙瘩浸润性生长的结果及其复发的原因之一。为了证实瘢痕疙瘩周围皮肤中异常细胞的存在,本实验对瘢痕疙瘩周围皮肤成纤维细胞增殖凋亡等生物学活性进行了检测,以期能进一步了解瘢痕疙瘩发展机制并为临床提供一个更为准确的治疗范围。方法:实验分瘢痕疙瘩边缘部、瘢痕疙瘩中央部、瘢痕疙瘩周围皮肤、瘢痕疙瘩病人其它部位正常皮肤及非瘢痕体质健康人正常皮肤。1.采用体外培养成纤维细胞技术比较瘢痕疙瘩及其周围皮肤与正常皮肤细胞形态及分布特征,进一步用MTT比色法比较各组细胞增殖活性并通过流式细胞仪分析其增殖周期。2.运用激光流式细胞仪比较无血清培养条件下和FasMcAb作用后各组成纤维细胞凋亡率的差异。3.采用PCR及DNA测序技术检测瘢痕疙瘩及其周围皮肤是否存在P53及Fas基因的突变。结果:1.瘢痕疙瘩周围皮肤细胞形态与正常皮肤和瘢痕疙瘩均一致,但分布上其散在区域存在交错重叠生长现象与瘢痕疙瘩相似。瘢痕疙瘩周围皮肤细胞增殖活性与瘢痕疙瘩中央部相似,介于瘢痕疙瘩边缘部与正常皮肤之间,细胞周期分析结果与此一致。2.无血清培养条件下瘢痕疙瘩周围皮肤成纤维细胞凋亡增长率介于瘢痕疙瘩和正常皮肤之间。FasMcAb作用下,瘢痕疙瘩周围皮肤成纤维细胞凋亡率虽有所增加,但总体上与瘢痕疙瘩无显著差异,而与正常皮肤存在显著差异。3、对PCR产物DNA序列分析后发现,所有体外培养瘫痕IZ箔)q田皮肽成纤维细胞(6/6)均存在P53外显子 4的基因突变,有2例(二历)P53外显子5存在基因突变,有4例(4/6)存在Fas基因外员子8突变,表现为点突变及移码突变。均与同病人疲痕疙瘩细胞基因序列分析结果一致,而癫痕疙瘩病人正常皮肤及非癫痕体质健康人正常皮肤成纤维细胞则未发现有任何形式的基因突变。结论:乙瘫痕疙瘩不同部位成纤维细胞生物学活性不尽一致,可从一个方面解释其边缘部细胞增生明显且浸润主长。2.疲痕疙瘩周围0.scm以内外观为正常的皮肤真皮内存在异常成纤维细胞,这可能为撅痕疙瘩浸润性生长的结果及其治疗后易复发的原因。3.对瘫痕疙瘩山川仆应超出几边界 @定范因。……   
[关键词]:瘢痕疙瘩;周围皮肤;成纤维细胞;增殖活性;凋亡;Fas;P53;基因突变
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:第一军医大学2001年