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茶树β-1,3-葡聚糖酶基因cDNA片段的克隆与序列分析

王朝霞

  茶树是我国重要的经济作物之一。真菌病害是茶树最主要的病害,一直影响着茶树的产量与品质。因此,有必要利用基因工程技术控制真菌病害,培育茶树抗病品种。本论文首次从茶树中克隆出β-1,3-葡聚糖酶基因cDNA1369bp连续序列,结果如下:根据茶树叶片生化特点,对克氏—步法分离总RNA的方法做了部分修改,从茶树鲜叶中分离、提取总RNA。根据已发表的其他植物中β-1,3-葡聚糖酶基因的保守序列,设计一对简并引物,采用RT-PCR技术,从茶树中扩增出366bp的cDNA片段(RTPCR.1)。将该片段克隆到PGEM-T Easy Vector上进行序列测定和分析,结果表明,此片段核苷酸序列和推导的氨基酸序列与已报道的其他植物β-1,3-葡聚糖酶基因的cDNA相应序列有很高的一致性,认为该PCR特异产物为茶树β-1,3-葡聚糖酶基因的cDNA片段。根据此片段序列设计特异引物,利用3’RACE获得β-1,3-葡聚糖酶cDNA 3’端1252bp的cDNA片段(3RACE.1),序列分析表明:RTPCR.1 3’端249bp与3RACE.1 5’端为重复序列,3RACE.1的核苷酸序列及其推测的氨基酸序列与拟南芥的β-1,3-葡聚糖酶基因家族的cDNA相应序列同源性为50%-90%,因而本研究从茶树中共克隆出含3’端β-1,3-葡聚糖酶基因的cDNA1369bp的连续序列。……   
[关键词]:茶树;β-1;3-葡聚糖酶;cDNA;核苷酸序列
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:安徽农业大学2001年