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噬菌体表达短肽模拟日本脑炎病毒糖蛋白的研究

任君萍

  日本脑炎病毒(JEV)引起的流行性乙型脑炎(乙脑)是一种严重的急性中枢神经系统传染病,主要在东南亚等地区流行,采用疫苗进行预防接种是控制该病流行的有效措施。但是国内外使用的乙脑疫苗尚不理想,最早采用的鼠脑灭活疫苗引起的并发症较多,且需多剂接种;目前使用的减毒乙脑疫苗虽克服了前者的缺点,但毒力逆转的可能性却不能排除,所以乙脑新型疫苗的研制势在必行。JEV囊膜糖蛋白E是诱导特异保护性免疫的主要结构蛋白,因而成为乙脑亚单位疫苗的首选组分。近年来乙脑亚单位疫苗和基因工程疫苗的研究取得了一些有益的进展,但对JEV抗原表位的认识还不十分清楚,也影响了乙脑新型疫苗的研制。噬菌体随机肽库技术是近年来新兴的一个探索受体与配体相互作用位点、寻求高亲合力生物活性配体分子、探测未知蛋白空间结构表位的有力工具,在疫苗研究、药物设计以及疾病诊断等方面均显示出广阔的应用前景。噬菌体随机肽库含有的大量不同序列多肽可作为靶抗原表位的模拟肽,为确定抗原表位序列,提供了一种新的研究方法。用靶抗原的mAb筛库得到的特异性多肽,可鉴定mAb的结合位点,或作为病毒保护性抗原,第四军医大学硕士学位论文一为研究病毒关键抗原表位的结构和功能,以至设计新型疫苗奠定基础。本研究选用 2株抗 JW E蛋白的保护性 mAb 2H4、2F2分别淘筛噬菌体随机15肽库,对获得的2种噬茵体表达短肽的抗原性与免疫原性进行了鉴定。筛选到的2种噬菌体表达短肽mZH4(RQDPQWPYANSTIAR)和mZFZ(HTPQWSPSQYRPSL)经鉴定能分别与 InAb 2H4、2F2特异结合,并且这种结合可被 JEV天然抗原所抑制;将 mZH4、mZFZ与 JEV E蛋白进行同源性分析后,得到的两段一致序列ST XAXAR、PXXSPS可能分别为mAb 2H4、2F2识别的模拟表位;呈现mZH4和mZFZ白噬菌体分别免疫了小鼠,观察到小鼠分别产生了抗mZH4和 mZFZ的持异性抗体;抗JEV天然抗原的小鼠血清也能与噬菌体表达短肽mZH4、mZFZ特异结合。综上所述,通过多种鉴定说明噬菌体表达短肽mZH4和mZFZ能够摸拟JEV E蛋白的部分杭原性,并且具有一定的免疫原性,这些结果加深了对JEVE蛋白表位的认识,为进一步研究乙脑新型疫苗提供了有益的线索。……   
[关键词]:日本脑炎病毒;噬菌体表面呈现;随机肽库;模拟位;单克隆抗 体;免疫
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:第四军医大学2001年
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