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纳豆菌液体发酵产生纤溶酶的研究

田艳

  心血管疾病是一种严重危害老年人健康的常见疾病,溶血栓疗法是这类疾病重要的治疗方法之一。由于现用溶栓药或多或少都有一些缺陷,因此人们一直都在研制开发新型的溶血栓药物。其中,从日本的传统食品纳豆中分离出具有纤溶活性的纳豆激酶,引起了人们的极大兴趣。本研究利用本实验室保存的,从纳豆中分离出的有纤溶活性的菌株Bacillus.natto. strain B-2023,对其液体发酵产生纤溶酶(暂命名为BH-1)的条件进行了优化,用自制的猪血浆平板测酶的活性,得出以下结果:最优氮源是大豆蛋白胨,2%的氮源利于产酶;最优碳源是木糖,2%的碳源利于产酶;碳氮比以1∶1合适;离子中以Ca~(2+)的影响最大,0.02%利于产酶;磷酸盐以Na_2HPO_40.2%;NaH_2PO_40.1%为优;表面活性剂的添加有助于酶的分泌,添加量和添加时间十分重要,以0.1%的油酸钠在12h时加入为好;35℃、pH7利于产酶;装液量20ml/100ml,接种量以2%为佳,种子种龄为24h。这样的条件下发酵产酶,获得的纤溶酶用纤维蛋白平板测活,UK标准曲线作对照,其产酶量为786IU/ml,是最初的2倍多。将发酵上清液经粗分级分离和Sephadex G-100凝胶过滤,得到具有纤溶活性的柱层析产物BH-1。BH-1经SDS-PAGE蛋白电泳,在凝胶约28KD的位置显单一条带,推测它可能为单链蛋白。BH-1的稳定性在25℃和37℃时较好,55℃以上迅速失活;其最适pH为7.0,在pH7.0~8.0范围内稳定性较好。用普通的纤维蛋白平板,以及80℃加热使纤溶酶原失活的纤维蛋白平板作对比试验,发现BH-1在两种平板上的溶圈直径一样大,可判定BH-1直接作用于纤维蛋白,而不是纤溶酶原的激活剂。……   
[关键词]:纳豆;纳豆菌;纤溶酶;液体发酵;分离纯化
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华南热带农业大学2001年
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