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FK506对TNF-α诱导的HaCaT细胞分泌NO及IL-1β、IL-2、IL-8的影响

王志东

  银屑病是一种常见的慢性、复发性、炎症性的皮肤病,属多基因控制遗传性疾病。其发病机理不详,免疫功能异常可能与本病相关。发病机理主要涉及到四种细胞:角质形成细胞(keratinocyte,KC)、淋巴细胞、内皮细胞(endothelialcell,EC)和中性粒细胞,其中前两者最为关键。多年来,在银屑病皮损中有关KC免疫功能方面,已做了许多研究工作,并取得了一定的进展。已证明在银屑病皮损中细胞因子系统网络失衡,一部分细胞因子高表达,另一部分细胞因子则可能受到抑制。细胞因子系统网络失衡已被认为在银屑病发病机理中具有重要意义。在现代银屑病免疫-炎症发病机制这个概念下,细胞因子系统是抗银屑病药物作用靶位的观点,已日益被人们所接受。针对银屑病发病机理中细胞因子方面的变化及调控的研究,近来已成为研究的热点。FK506(Tacrolimus)是一种新型免疫抑制剂,在临床银屑病治疗中已经证明有效,但其在银屑病皮损中具体作用机制尚有待进一步探明。本实验的目的,通过体外培养的KC系HaCaT细胞,研究FK506对TNF-α诱导的HaCaT细胞分泌NO及细胞因子IL-1β、IL-2、IL-8的影响,以进一步探讨银屑病皮损中细胞因子网络的变化机制,及FK506在银屑病皮损中对KC如何发挥它的免疫抑制作用。本研究的第一部分建立了体外人角质形成细胞(HaCaT)炎性模型。首先进行了HaCaT细胞的增殖抑制实验,即细胞活力实验。观察了不同浓度的FK506,在不同的时间点,对HaCaT细胞的影响作用情况,结果发现:静息的HaCaT细胞,加入不同浓度的FK506刺激48h后,对HaCaT细胞的影响表现为:(1)FK506在高于1.0×10~(-6)M浓度时,表现出急剧的抑制作用;(2)FK506在1.0~2.0×10~(-6)M浓度下,表现出对HaCaT细胞安全且有效的抑制作用。(3)FK506在高于2.5×10~(-6)M浓度时,表现出具有细胞毒性作用。观察到培养皿中无细胞集落形成。(4)FK506在1.0×10~(-9)~1.0×10~(-6)M浓度间对KC增殖未第二军医大学硕士答辩论文出现明显抑制。其次,通过在HaCaT细胞的增殖抑制实验中取得的数据,建立了体外 hF a诱导的 HaCaT细胞炎性模型。得出以下结论:()在 IN’---。诱导的条件下,F*506对*沈盯细胞影响的最佳时间点在8小时门*10加为其有效安全浓度;u)在无TNF川诱导的条件下,FK506对HaCaT细胞分。泌的细胞因子无明显影响一氧化氮(Nitric Oxide,NO)是一种源自于EC的松驰因子,同时又是一种重要的胞内、胞间信使。己有研究表明,在银屑病皮损中NO高表达,它与银屑病兔疫机制有密切关系。本研究第二部分探讨FK506对ITNF川诱导的HaCaT细胞NO分泌的影响。采用Gness法,观测了在不同的时间点,有/无FK506的影响下,HaCaT细胞分泌NO水平的变化。结果表明:(l)FK506对TN’F-口诱导的HaCaT细胞NO分泌有抑制作用;(2)FK506对未经WIF-a诱导的nacar细胞 wo分泌无明显抑制作用;o)同时进一步证实了rxs06的抗炎及兔疫抑制作用。依据目前现代银屑病兔疫-炎症机制细胞因子网络学说,在细胞因子与NO的相互关系这一点上,一般认为KC中的细胞因子触发了NO的分泌。大多数细胞中细胞因子与NO两者之间存在着因果关系。据此观点我们推测,F*506首先通过抑制h}。诱导的*aC aT细胞中细胞因子的分泌,如 IL-2、IL-8等,进而达到抑制NO分泌的目的。银屑病有三种主要的病理特征:异常分化、KC增生,炎症。KC具有一定的免疫功言,能分泌大量的分子,如IL-l、IL-2、IL-8、ICAM等。本文第三部分研究了 FK506对hF-口诱导的HaCaT细胞细胞因子几l日JL毛二LE分泌的影响,并进一步探讨了FK扣6对*C中细胞因子网络的作用机制。通过采用ABC-HPR法,观测了在不同的时间点,有/无FK506的影响下,HaCaT.细胞分泌细胞因子*q、IL毛。IL{的水平变化。结果表明,FK506对ITNF-a诱导的 HaCaT细胞分泌的 IL4、IL2有抑制作用;然而,对 fi{无明显抑制作用。依据银屑病免疫-炎症机制细胞因子网络学说,我们认为:门KC作为整个兔疫-炎症机制网络中的一个组成部分,是兔疫抑制剂FK506作用的重要靶位;u)己有研究证实,FK506对 T淋巴细胞、B淋巴细胞中细胞因子及其它分子的分泌,具有选择性作用;这里,我们发现,FK506对KC分泌的细胞因于具有同样的选择性抑制作用。-……   
[关键词]:银屑病;FK506;HaCaT细胞;细胞因子
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:第二军医大学2001年
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