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微生物油脂的开发研究

林娟

  本课题研究内容包括初筛方法确定、菌种选育、产脂条件优化、多不饱和脂肪酸(亚油酸和γ-亚麻酸)富集等四个部分。初筛方法的研究目的是为了确定一个简便有效的产脂微生物的检出方法。采用数学分析的方法对脂肪粒计数法、苏丹Ⅲ菌泥染色法、碳饥饿检出法进行比较与探讨。试验表明苏丹Ⅲ菌泥染色法简便快捷,其结果与菌体的含油率有较好的相关性,相关系数R=0.96,此法是筛选产脂微生物的较理想的初筛方法;碳饥饿检出法准确性较高,但过于繁琐;相比之下,脂肪粒计数法虽简便,但缺乏准确性,使用时必须同时考虑脂肪粒的大小。菌体含油率(z)与脂肪粒大小(x)、数目(y)之间的相互关系可用一个两因素二次多项式回归方程表示:z=4.34-24.096x+1.162y+8.551x~2+2.824xy-0.212y~2。菌种选育的目的是为了获得油脂高产突变株。(1)采用2,2’—联吡啶药物平板培养的方法测得2,2’—联吡啶药物的最低抑菌浓度为240ug/10ml培养基。(2)比较紫外线诱变、激光诱变的诱变效果。试验表明激光诱变的突变率大大高于紫外线诱变的突变率,而又以激光诱变10min的突变率最高,但正变幅度较小;而激光诱变20min的正突变株的变异幅度大,因此,为了使含油率大幅度提高,可采用偏高剂量诱变。经过高低剂量相结合的激光诱变处理方法,得到突变株BH-56-16,其含油率为48.05%,其中含油酸42.9%,亚油酸12.8%,γ-亚麻酸21.7%。(3)探讨2,2’—联吡啶抗性对油酸、亚油酸、γ-亚麻酸组成的影响,结果显示抗性大的菌株细胞中亚油酸、γ-亚麻酸的含量相对较低,因此推测菌株对2,2’—联吡啶抗性能力与其细胞内以油酸为底物的脱饱和酶的活力有关。产脂条件优化部分对影响被孢霉菌生长和油脂合成的几个主要条件进行研究探讨。结果表明其最佳产脂条件为:葡萄糖浓度为7%,碳氮比为50:1,接种量为5%,温度为28~30℃,PH=6.5,培养时间为4天。在此条件下培养,被孢霉菌的含油率可达44.03%,油脂系数为13.75。多不饱和脂肪酸富集部分对脲包法分离混合脂肪酸时甲醇与尿素的用量进行探讨。研究表明当混合脂肪酸:尿素:甲醇=1:3:7.88时,富集效果最佳。在此条件下富集,微生物油脂中多不饱和脂肪酸(亚油酸和γ-亚麻酸)的含量从原来的9.87%提高到44.79%,而其中γ-亚麻酸的含量从2.03%提高至19.79%,富集了将近10倍。……   
[关键词]:产脂微生物;含油率;初筛方法;诱变育种;产脂条件优化;多不饱和脂肪酸;富集
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:福州大学2001年