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辣椒种质资源的RAPD技术体系建立及其应用研究

马艳青

  通过对辣椒RAPD反应的各个环节,包括DNA提取、PCR反应进行筛选和优化,确定了一个简单、高效、相对稳定的RAPD系统;在此基础上,对来自国内外的46个辣椒种质资源进行了RAPD分析,结合统计分析方法,对46份材料进行了聚类分析和亲缘关系演化分析。结果表明:①辣椒DNA的提取以幼嫩叶较好,DNA产量高,质量优,0.5克幼嫩叶片提取的DNA足够用于RAPD分析。②辣椒DNA的提取,试剂盒法提取的DNA产量最高,纯度最高,质量最好,操作最简单,但费用贵。在样少、需DNA量多质高时,可采用此法。③辣椒RAPD优化体系为:dNTP 0.5ul,引物1ul、Buffer 2.5ul、Taq酶0.5U,模板DNA 2ul,纯净灭菌水18.5ul,反应总体积为25ul;扩增反应在PTC—200型PCR仪上进行,PCR扩增程序95℃预变性1min,36℃退火40s,72℃延长1min 20s,94℃变性20s,41次循环,36℃退火1min,72℃延长3min,4℃保存。④引物T11、Y14、D13在辣椒遗传多样性研究、品种鉴定、指纹图谱构建以及它们的杂种一代鉴定方面有较大的应用价值。⑤根据基因组指纹图谱聚类分析,46份辣椒品种资源可分为六大类,来自贵州的罗甸椒、亚洲蔬菜研究与发展示中心的ICPN9-20、辽宁的紫色观赏椒、云南的金沙江辣椒和小米辣各自独立成一类,其余品种聚为一大类。⑥RAPD基础上的辣椒亲缘关系演化是:小果多籽味辛辣类型圆锥椒→小果味辛辣果多类型簇生椒→长果味辣易干制类型长线椒→长果、肉厚味辣鲜食干制兼用类型长线椒→肉厚果大有辣味类型牛角椒→肉厚果大近似灯笼形或灯笼形,少辣或无辣味类型灯笼椒。……   
[关键词]:辣椒;品种资源;RAPD
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:湖南农业大学2001年