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猪瘟病毒广西流行株E_2基因扩增与反应条件的优化研究

韦栋平

  本研究引用HCV特异性引物A1/A2直接对来自广西部分地区58份疑似猪瘟病料进行检测,其中34份为阳性,阳性率为58.32%。再根据已发表的猪瘟病毒核酸序列,设计并合成4对EP1/EP4、EP2/EP3、EP3/EP7和EP5/EP6,以引物EP1/EP4和EP2/EP3或EP3/EP7和EP5/EP6配对,应用RT-PCR技术分两段扩增猪瘟病毒全E2基因,并对反应条件进行优化。结果显示:引物EP1/EP4和EP2/EP3只能扩增猪瘟兔化弱毒(HCV)和石门系强毒而不能扩增广西流行株:EP3/EP7和EP5/EP6则可成功扩增出广西流行株和另外两个毒株。反应条件中,反转录所需的总RNA量为10μ1(约20μg);PCR扩增时,cDNA用量为12.5μl,正、负引物各用 50 Pmol,EP3/EP7和EPS/EP6引物对分别以57℃t和61℃的退火温度PCR扩增35个循环,PCR产物量和扩增特异性句达到最佳水平。猪瘟病毒广西流行株E2基因的成功扩增和最佳反应条件的建立为今后E2基因的克隆与序列分析及其更深入的研究奠定了实验基础。……   
[关键词]:反转录─聚合酶链反应;猪瘟病毒广西流行株;E_2基因;最佳反应条件
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:广西大学2001年