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核苷类药物FDN抗乙型肝炎病毒的实验研究

王雁

  乙型肝炎是世界上最常见的传染病之一。全世界估计有3.5亿(其中我国有1.3亿)慢性乙肝病毒(HBV)携带者,其中约有25%为慢性肝炎患者。尽管乙肝疫苗已广泛用于预防,且效果明显,但仍有数百万人未得到保护而感染了HBV。至今,慢性乙型肝炎的治疗仍缺乏特异、高效的方法,目前采用抗病毒、免疫调节、改善肝功能、抗肝纤维化等综合治疗。抗病毒治疗是慢性乙肝综合治疗中的主要措施。临床上常用的抗病毒药物主要有干扰素和核苷类似物两大类。前者的抗病毒作用一般认为是与特异性细胞受体结合诱导细胞产生抗病毒蛋白,抑制病毒的复制过程。至80年代开始就有很多的核苷类似物用于乙肝的抗病毒治疗,其中拉米夫定是在我国广泛用于临床治疗慢性乙肝的核苷类药物之一,其疗效显著且副作用小。但近来研究发现,长期服用拉米夫定后可能会产生HBV的变异,对该药产生耐药,限制了它的应用。基因治疗包括核酸疫苗、反义寡核苷酸等的抗乙肝病毒作用,已被国内外众多实验室所证实。但目前尚未用于临床,还需要作进一步研究。因此,寻找新的抗乙肝病毒药物显得尤为重要,核苷类药物是一重要方向。2001年浙江大学硕士学位论文本实验研究了一种新的核昔类药物:p-L2’,3’-双脱氧-5-氟-胞昔(P-L-Z’,3’-dideoxys-luoro-cytidine,本文简称为FDN)的抗HBV作用。近年发现,核昔类药物 2’,3’-双脱氧胞昔(DDC)有抑制 HBV DNA复制的作用,但其选择性不高,对细胞生长亦有较强的抑制作用。在其5位上引入氟原子后能保留活性,并改善它的药理性质。我们选用能合成和分泌乙肝病毒颗粒和表达所有HBV抗原标志物的2.2刁 5细胞为模型,分别加入含0刀008 HM、0.004 pM、0刀2 uM、0.IVM、0.spM浓度FDN的DMEM培养液,并以拉米夫定作为阳性对照,培养72小时,换液一次。药物共作用144小时,通过荧光定量PCR法检测培养上清和 2二.!5细胞内 HBV DNA含量的变化,以及通过放免法检测细胞培养上清中HBsAg、HBeAg含量的变化,观察FDN抑制乙肝病毒复制与合成的作用。同时,应用MTT法观察药物对2.2l 5细胞本身生长的影响。结果发现,FDN在0.0008 V M.0.Iv M范围内病毒抑制率随药物浓度增加而增大,抑制细胞培养液中50%乙肝病毒的浓度 (l;。)为002 V M。抑制 2.21 5细胞内50%乙肝病毒的浓度(’IC。。)为 0刀09if M。拉米夫定相应的ICS。、*ICS。为 0二、0刀门卜 M。同时,细胞培养上清中HBsAg、HBeAg的含量也有所下降,但对两者的抑制率较低,在0.IHM达最大抑制率分别为55.96%、42.71%,而拉米夫定对两者的抑制作用不明显。该结果提示,(l)FDN能抑制 HBV DNA复制,其抑制效率略高于拉米夫定。(2)FDN作用于细胞内 HBV的复制过程,通过细胞内 HBV DNA水平的下降,导致对细胞外分泌的乙肝病毒颗粒的减少,同时导致HBSAg、HBeAg的合成和分泌的减少。FDN抑制50%2.2* 5细胞生长的浓度(TC。。)为30 u M,是IC。。的1500倍,提示该药安全性较高。本实验结果显示,FDN是一种有潜力的抗乙肝病毒药物。如开发成功;将有希望应用于临床,尤其是治疗对拉米夫定耐药或产生其他不良反应的乙肝患者;也可与拉米夭定及其他抗病毒药物联合应用,以提高抗病毒疗效、减少和/32001年浙江大学硕士学位论文或延缓变异耐药株的出现。本实验为FDN进一步的动物实验和临床试验打下了一定基础。……   
[关键词]:乙型肝炎病毒:核苷类似物;抗病毒治疗;2.2.15细胞
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:浙江大学2001年