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工频磁场对星形胶质细胞GJIC的影响

李秀珍

  背景与目的 工频磁场的生物学效应,尤其是工频磁场对肿瘤发生发展的影响,是当前国际上热点问题。工频磁场对脑的影响研究较少。在流行病学调查方面,工频磁场辐射是否致脑肿瘤患病率增高尚有争议。有实验研究认为工频磁场可致脑细胞DNA单链、双链断裂率,DNA-DNA、DNA-蛋白交链形成率增高。近几年来,细胞间隙连接通讯(GJIC)的抑制被看作是检测可疑促癌剂的一个重要指标。本课题试图通过观察50Hz正弦交变磁场对SD大鼠大脑星形胶质细胞GJIC的影响来研究工频磁场是否致脑肿瘤或协同其他促癌剂(如:佛波酯)致脑肿瘤。材料与方法1.实验分组:(1)空白对照组(0mT工频磁场);(2)0.8mT工频磁场处理组;(3)1.6mT工频磁场处理组:(4)TPA组:(5)0.8mT工频磁场+TPA组;(6)1.6mT频磁场+TPA组。2.星形胶质细胞培养、鉴定:取生后3天内SD大鼠大脑组织,原代培养9天,传代一次,培养6天。采用免疫组织化学方法——SP法,用GFAP鉴定星形胶质细胞,星形胶质细胞阳性率达98%以上。3.星形胶质细胞处理:TPA组细胞与3ng/ml TPA接触1小时;磁场辐射组细胞接受0.8mT或1.6mT、50Hz正弦交变磁场暴露24小时;TPA+磁场辐射组细胞接受0.8mT或1.6mT,50Hz正弦交变磁场辐射23小时后,加入3ng/ml TPA,再共同作用1小时。空白对照组置于假辐射器内24小时。4.FRAP法检测GJIC:细胞经处理后,6-CFDA负载,然后在LSCM上用FRAP法检测。获取漂白前、后各次扫描图像,漂白细胞及校正细胞荧光强度的变化,并得出相应的时间-强度变化趋势图。5.SPSS10刀软件包做Kruskal。lid W8lliS’S检验、Kefld。11’S等级相关检验,O<0.05表示有显著性差异。技果1.各处理组相对荧光强度恢复百分比(CFIRP)在漂白后omin为0%,随扫描时间延长,CFIRP逐渐增高。空白对照组在漂白后10min时,CFIRP基本恢复至漂白前水平,所以选择漂白后10min时的相对荧光强度恢复速率(CFIRR)进行比较。同时随扫描时间延长,各处理组CFIRR逐渐下降。2.TPA是一种己知强促癌剂,能抑制多种细胞的GJIC,其抑制效应与浓度、作用时间有关。本实验根据有关文献研究3ng/ml1”PA作用1,J’时,结果得出:TPA浓度为3ng/ml时能够明显抑制星形胶质细胞GJIC(CFIRRC。n;r。::9.74;CFIRRTpA:4.53,H=12,084,p=0.00)。3.空白对照组、0.smT工频磁场处理组、1.6mT工频磁场处理组CFIRR 分别为:9.74、8.25、6.68。由上述数据可知,随着磁场强度的增强,CFIRR逐渐下降,呈负相关(,=-0.180,p=0刀32),说明工频磁场对GJI的抑制作用随磁场强度(0~1.6mT范围内)增强呈递增趋势。但是 0.8或 1.6mT频磁场不能够抑制星形胶质细胞 GJIC(H—4.124,p—0.127,与空白对照组比较)。4.空白对照组、TPA组、0.smT工频磁场+TPA组、互.6mT频磁场+TPA组 CFIRR分别为 9.74、4.53、3.32、2.16。随着与TPA共同作用的工频磁场强度的增强,CFIRR逐渐下降,呈负相关(T=-0,338,p。0刀00)。0.smT或1石mT工频磁场与TPA(3ng/ml)共同作用能够抑制星形胶质细胞GJIC(H=32石17,p-0.000,与空白对照组比较)。5.TPA、0.smTI频磁场+TPA组、1.6mT工频磁场+TPA组CFIRR分别为4.53、3.32、2.16。0石mT或1.6mT工频磁场与TPA(3ng/ml)无协同增强对星形胶质细胞GJIC 抑制作用(H=2.589,P=0.274,与TPA组比较)。同时随着与TPA共同作用的工频磁场强度的增强,CFIRR逐渐下降,但是CFIRR下降等级相关性检验不具有统计学意义(,一0.136;p功.173人结论2l.FRAP法是评价可疑促癌剂对GJIC作用的简便而可靠的方法。2.3nglml TPA作用 1,J’时,能够高度抑制星形胶质细胞 GJIC。3.0.smT或1.6mT、50Hi正弦交变磁场单独辐射24 ,J’时不能抑制星形胶质细胞GJIC,协同TPA也不能增强对星形胶质细胞GJIC的抑制作用。但是磁场对星形胶质细胞GJIC的抑制作用随着磁场强度(0~1.6mT范围内)增强呈递增趋势。……   
[关键词]:星形胶质细胞;TPA;交变磁场;工频磁场
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:浙江大学2001年