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Fas介导的病理性瘢痕成纤维细胞死亡信号传递及基因调控的实验研究

鲁峰

  背景及目的:我们先前的实验发现:FasMcAb不能诱导瘢痕疙瘩Fas受体高表达的成纤维细胞的正常凋亡,同时其胞内外源性抑制蛋白Bc1-2表达阳性率亦较低,提示:瘢痕疙瘩成纤维细胞Fas介导的死亡信号通道阻断。为明确瘢痕疙瘩成纤维细胞Fas介导的死亡信号通道阻断的原因及具体阻断位点,我们对Fas介导的病理性瘢痕成纤维细胞死亡信号通路进行了研究,旨在探索导致瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡异常的根本原因。方法及内容:采用组织培养技术,以手术切除的瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮肤为组织来源的体外培养的成纤维细胞为研究对象;1.应用粘附式细胞仪检测及比较各种来源的细胞缝隙连接介导的细胞间通讯。2.以FasMcab为处理因素,探讨Ca~(2+)、H~+、LPO(氢过氧化物)在其相应死亡信号通道中的作用。检测和比较FasMcab作用后增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞内神经酰胺的变化。3.银染PCR-SSCP筛选Fas基因的突变,最后可疑阳性的PCR样本进行DNA测序。。结果:1.正常皮肤成纤维细胞的细胞间通讯正常,增生性瘢痕成纤维细胞的细胞间通讯受到抑制,瘢痕疙瘩成纤维细胞的细胞间通讯被阻断。2.在FasMcab作用下,增生性瘢痕成纤维细胞内Ca~(2+)、LPO、神经酰胺显著增高而瘢痕疙瘩成纤维细胞内Ca~(2+)、LPO、神经酰胺无变化;在FasMcab作用下,增生性瘢痕、瘢痕疙瘩成纤维细胞内H~+均下降,两组间无显著的差异。3.经PCR-SSCP检测,20%(2/10)的瘢痕疙瘩组织中发现异常电泳带,提示可能存在Fas基因突变。经DNA测序证实这两例突变均为位于Fas cDNA的755bp处的“A”缺失而导致的移码突变。结论:1.细胞间通讯被证明与细胞生长的接触抑制及细胞的浸润性生长密切相关,通过本实验揭示细胞间通讯被阻断可能是痰痕疙瘩呈”蟹足样”浸润性生长的细胞生物学机制。2*as介导凋亡的异常可能是瘤痕疙瘩成纤维细胞增殖-凋亡调控异常的细胞生物学机制。在FasM0山。作用下,胞内 Ca2+、LPO产生的障碍可能直接导致痰痕疙瘩的凋亡异常。3.作为Fas介导的死亡信号通道中的第二信使,瘤痕疙瘩成纤维细胞内神经酚胺产生有缺陷。因此,Fas介导的癫痕疙瘩成纤维细胞死亡信号传导阻滞是“上游”事件。#..编码ras分子死亡域结构基因的移码突变可能导致Fas受体功能丧失,从而导致成纤维细胞的凋亡异常……   
[关键词]:瘢痕疙瘩;缝隙连接;Fas;细胞间通讯;神经酰胺;Ca~(2+);LPO;H~+;PCR-SSCP;基因突变
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:第一军医大学2000年