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系统性红斑狼疮患者T淋巴细胞TCR/CD3复合物介导的信号传导的研究

杨庆永

  目的:研究SLE患者T淋巴细胞原发的功能异常是否与其生物化学信号传导异常有关,探讨SLE的发病机理。方法:用尼龙柱分离肝素化的静脉血得到T淋巴细胞悬液,用流式细胞术测定CD_3阳性细胞90%以上,用CD_3单抗与羊抗鼠二抗IgG相交联刺激T淋巴细胞,用粘附细胞仪连续观察10分钟,观察T淋巴细胞胞内游离钙离子的变化,用流式细胞术检测正常人T淋巴细胞和SLE T淋巴细胞的CD_3~+阳性率是否有差异。为了检测钙离子反应的异常是否是胞外钙离子内流所致,T淋巴细胞被激活后加入1μM Ca~(++)-ATP酶抑制剂Thapsigargin,用粘附细胞仪连续观察10分钟。为了检测钙离子反应的异常是否与胞内钙离子贮存库的释放有关,在测量前加入5mM胞外Ca~(++)偶合剂EGTA,然后用粘附细胞仪连续观察10分钟,为了检测钙离子反应的异常,是否和InsP_3生成有关,用InsP_3放射受体试剂盒检测InsP_3生成量。同上制备T淋巴细胞是液,用CD_3单抗与羊抗鼠二抗IgG相交联和rIL-lα共同刺激T淋巴细胞24小时,用RT-PCR检测IL-2和IL-2R mRNA的表达,证实T淋巴细胞是否活化。用PKA检测试剂盒检测T淋巴细胞PKA总体活性变化,为探讨这些变化是否与SLE血清免疫复合物、血中IFN-α的增高有关,用SLE血清或含不同浓度IFN-α的完全培养基和正常人T淋巴细胞培养24小时,然后用上述方法激活T淋巴细胞,分别测量T淋巴的PKA总体活性。结果:1.正常人和SLE T淋巴细胞的[Ca~(++)]i反应的基准值相似(p<0.74),SLE患者高峰值、平台值明显高于正常对照T淋巴细胞(P<0.004,P<0.002)。2.正常1”淋巴细胞和SLE T淋巴细胞*;;阳性率没有差异。3.加 in M Thapsigargin后二者的【Ca””h反应没有差异,加入 smMEGTA后,二者的「Ca门i反应有显著差异。4.二者的InsP;;生成量无差异。5.SLE T淋巴细胞活化后叫A总体活性是下降的,SLE血清免疫复合物不能使下常人T淋巴细胞的PKA总体活性下降。SLE T淋巴细胞活化后总体PKA活性下降和血清中的兔疫复合物无关。。6.不同浓度的IFN-口也不能使正常人T淋巴细胞PKA总体活性下降。结论:1.SLE T淋巴细胞TrCR几D。介导的信号传导途径存在异常。2.SLE T淋巴细胞m/CAMP/PKA信号传导途径存在异常。3.S[卫 T淋巴细胞功能异常是原发的,是山于细胞内生物化学信号途径异常所致。……   
[关键词]:钙离子;蛋白激酶A;TCR/CD_3复合物;系统性;红斑狼疮;信号传导
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:第一军医大学2000年
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