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干扰素α和人参皂甙Rg3抗肿瘤血管形成机制的实验研究

耿怀成

  恶性肿瘤的生长依赖于血管的形成,肿瘤血管不仅为肿瘤生长提供营养和排泄代谢产物,而且也是肿瘤远处转移的直接通道。血管形成是指从预先存在的小血管上形成新血管的过程。人类从本世纪70年代就开始对肿瘤的新生血管形成进行系统的研究,己经证明恶性肿瘤的血管形成过程是受血管形成因子和抑制因子严密调控的。目前己经发现了30多种具有促血管形成作用的细胞因子,bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)、VEGF(血管内皮细胞生长因子)、TGF(转化生长因子)等是研究较多的几种,其中bFGF是目前己知的作用最强的一种促血管形成因子。已发现的抑制血管形成的物质也有30多种,干扰素是其中较重要的一种。干扰素对一些肿瘤有确实的疗效,以往证明其抗肿瘤作用是通过直接抑制癌细胞生长和调节机体抗肿瘤免疫实现的,近年来证明其有抗血管形成作用。人参皂甙Rg3是从人参提取的单体成分,文献报道具有抑制肿瘤浸润和转移的作用,但其确切机制尚未阐明。本课题实验从抗血管形成方面探讨它们抑制肿瘤生长和转移的机制。目的:l.探讨IFN-α和人参皂甙Rg3抗肿瘤血管形成的作用机理。2.探讨两种制剂是否有抗血管形成的协同效应。方法:l.用含不同浓度的IFN-α或Rg3的MI 99(以不含受试药物的M199为对照)培养人脐静脉内皮细胞,用含不同浓度的IFN-α或Rg3的1640(以不含受试药物的1640为对照)培养人肺癌SPC-A-l细胞,MTT法测细胞存活率的变化,判断对细胞增殖的影响。2.用药物预处理肺癌细胞,取培养上清制备条件培养液孵育内皮细胞,根据细胞存活率变化判断药物是否影响肿瘤细胞对内皮细胞的作用。3.用未经药物预处理的肺癌细胞的培养上清制备成含不同浓度IFN-α或Rg3的条件培养液后孵育内皮细胞,根据细胞存活率变化判断药物是否对内皮细胞的增殖有影响。4.在纤维蛋白胶中用含不同浓度IFN-α或Rg3的M199进行肺癌细胞和内1Wf#&ffPZf&t 4tM#皮细胞的复合培养,检测对癌细胞诱导的内皮细胞小管形成的影响。5.用含不同浓度IFN心或Rg3的1640及单独用1640培养肺癌细胞,免疫组化检测细胞表达bFGF的变化。6.检测不同浓度的IFN心或Rg3对鸡胚尿囊膜血管新生血管形成的影响。实验结果:1.IFN吧浓度在100u/ml以下时肺癌细胞和内皮细胞存活率无明显变化,IFN以浓度在1000u/ml以上时肺癌细胞和内皮细胞存活率显著下降,且浓度越高细胞存活率越低。2.Rg3浓度在 25《00pg/ffil时两种细胞存活率均无明显变化。3.用IFN亿和Rg3预处理的肺癌细胞条件培养液孵育的内皮细胞存活率显著低于未处理组。4.含IFN.a的条件培养液孵育的内皮细胞存活率与单独未处理条件培养液组无明显差异,含 Rg3 50pg/thl以上的未处理条件培养液孵育的内皮细胞存活率比单独未处理条件培养液组显著降低。5.IFN-a浓度为10ujml、100u/ml时复合培养中的小管形成较对照组(单独用 M199)明显减少;Rg3浓度为 50pg/ffil、100pg/ffil、200pg/ffil时复合培养中的小管形成也明显减少,浓度为25pg/ttil时小管形成无明显减少;100u/ml的 IFN以与50pg/ffil的 Rg3共同作用的复合培养中小管形成减少最显著。6.单纯用1640培养的肺癌细胞免疫组化染色示bFGF呈强阳性表达;干扰素( 00u/ml)与Rg3联合用药的肺癌细胞bFGF呈弱阳性表达;干扰素100u/ml单独作用的肺癌细胞bFGF表达强于联合用药组,弱于单纯1640组;人参皂式Rg3 50收加 单独作用的肺癌细胞bFGF表达强于联合用药组,弱于单纯1640组。7.干扰素浓度在1000u/ml以上对尿囊膜血管新生有抑制作用,Rg3浓度在50附加 以上对尿囊膜血管形成有抑制作用。结论:1.低浓度的IFN-a( 00u/ml以下)对肺癌细胞或人脐静脉内皮细胞增殖无直接抑……   
[关键词]:肿瘤;血管形成;IFN-α;人参皂革Rg3;抗血管形成;bFGF;鸡胚尿囊膜
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:第二军医大学2000年