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新生隐球菌产黑素野生株与白化突变株酚氧化酶结构基因(CNLAC1)的比较研究

桑红

  新生隐球菌是一种具有荚膜的酵母真菌,能导致全身各脏器的隐球菌病,但主要侵犯中枢神经系统,其中严重威胁生命的隐球菌性脑膜脑炎占80%。随着使用免疫抑制剂的增加及艾滋病在全球的蔓延,新生隐球菌感染率不断上升。对这种酵母菌的潜在毒性因子的研究近来尤其引人注目。新生隐球菌与其他非致病性的隐球菌不同,当其在含有二酚化合物的培养基上生长时,在4~48小时内能产生黑素。产生的黑素为新生隐球菌的一个主要毒性因子。黑素形成主要是通过抵御免疫细胞释放的氧化剂而发生作用,82年明确膜结合的酚氧化酶是催化产生黑素的酶类。94年Williamson等率先纯化了新生隐球菌的这种具有二酚氧化酶活性的酶,并进行了一系列生化分析,鉴定为漆酶,经纯化后发现此酶为一种75Kda的糖基化蛋白,去糖基化后为 66Kda,克隆出新生隐球菌漆酶基因CNLAC1含一单 ORF(开放阅读框),编码为一含642个氨基酸的多肽,含 14个内含子(大小为52~340bp)。我们对新生隐球菌产黑素野生株和白化突变株进行了比较研究。首先用多巴培养基CT和咖啡酸玉米吐温二种培养基,从第二军医大学附属长征医院真菌病研究室128株新生隐球菌中筛选出一学位论文:新生隐球菌产黑素野生株与白化突受扮酚讽化酶结构丛因(CNLAC)的比较研究株不产黑素的新生隐球菌白化突变株CCCC10148,选一株产黑素野生株代表 CCCC10297进行研究。据CNLAC1的DNA序列设计合成了4对寡核苷酸引物,应用PCR分别对产黑素株及白化株进行DNA扩增。结果发现白化突变株存在约450bp的片段缺失,而野生产黑素株却无此缺失片段,这为新生隐球菌病的预后、治疗提供了可能的靶基因。我们将PCR产物克隆入PGEM丁载体,构建了重组表达质粒,转化大肠杆菌DH讣,并用测序仪 ABI PAISMTM377PN进行测序。发现相同条件下产黑素株与白化突变株不但基因长短不同而且序列也明显不同,这对我们提出了进一步研究的需要,它的成功将为我们探索隐球菌产黑素的致病机理提供理论依据,同时也为将来对隐球菌病的基因治疗提供可能。……   
[关键词]:新生隐球菌;黑色素;CNLAC1
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:第二军医大学2000年