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蝮蛇毒纤溶酶的分离纯化和性质研究

蓝秀万

  目的:从江浙蝮蛇毒中分离纯化无出血作用的纤溶酶,研究其理化性质,分析末端氨基酸序列,为进一步获得cDNA及全序列分析、基因克隆与表达及临床应用研究奠定基础。方法:应用Sephadex G-75,DEAE Sepharose Cl-6B柱层析分离纯化蝮蛇毒纤溶酶,用纤维蛋白平板测纤溶活性、pH对酶活性的影响、抑制剂对酶活性的影响。用PAGE结合纤维蛋白覆盖法定位纤溶组分电泳迁移率。SDS-PAGE测定分子量,IEF测定等电点,SDS-PAGE分析纤溶酶对纤维蛋白(原)肽链水解特异性。用浊度法研究其对人富血小板血浆由ADP诱导的血小板聚集的影响。发色底物法测其对底物S-2238、S-2251的Km值。结果:用PAGE结合纤维蛋白覆盖法定位测定江浙蝮蛇毒中至少有电泳迁移率为0.159、0.27、0.508、0.841的四个纤溶组分。从江浙蝮蛇毒中分离纯化到一个电泳迁移率为0.841,分子量为23.8ku,等电点为4.875,无出血毒性,对热稳定的纤溶酶。EDTA和β-巯基乙醇能抑制其活性并改变其空间结构,Cu~(2+)、Co~(2+)也抑制其活性,PMSF、PABA、Mg~(2+)、Zn~(2+)、Ca~(2+)、K~+对其活性无影响,说明它是一种单链金属蛋白酶,二硫键对维持其结构有重要作用,与纤维蛋白原或纤维蛋白保温5分钟能迅速水解Aα(α)链,随后缓慢水解Bβ(β)链,对γ(γ-γ)链无影响,证明其属α-纤溶酶。该纤溶酶可抑制ADP诱导的血小板聚集。对S-2251Km为1.72×10~(-4)mol/L,对S-2238Km为1.88×10~(-4)mol/L。N末端氨基酸序列为:QRFPTRYIEL。……   
[关键词]:纤溶酶;蝮蛇毒;无出血毒性;金属蛋白酶;α-纤溶酶
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:广西医科大学2000年