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鸡传染性贫血病的实验诊断与免疫机制的研究

王秀荣

  本实验针对鸡传染性贫血病的诊断工作建立了ELISA和IFA两种血清学诊断方法,以及病原DNA的PCR诊断方法,并将三种诊断方法进行系统比较研究。同时还进行了1日龄SPF雏鸡感染CAV后血清内SOD、GSH-P_x、MDA与血液中相关微量元素的研究。另外还开展了4周龄SPF雏鸡人工接种CAV后外周血液中CD3~+、CD4~+、CD8~+、γδT细胞亚群变化的研究,以及感染鸡胸腺、脾脏、法氏囊内CD3~+、CD4~+、CD8~+、γδT细胞亚群和B细胞的动态变化,全面深入地阐述SPF雏鸡人工感染鸡贫血病病毒后的免疫发病机理。研究结果如下:1.建立了ELISA和IFA两种血清学诊断方法以及病原DNA的PCR诊断方法,用三种诊断方法分别检测1日龄人工接种CAV后7天、14天、21天、28天感染鸡,结果ELISA的检出率分别为0/10、5/10、8/10、10/10,IFA的检出率分别为0/10、3/10、5/10、10/10,而PCR方法的检出率分别为10/10、10/10、10/10、10/10。结果表明,在感染早期阶段PCR的检出率明显高于ELISA、IFA,在感染后4周时三种检测方法都适用于对鸡传染性贫血病进行诊断。2.对1日龄SPF雏鸡感染CAV后7天、14天、21天、28天血清内SOD、GSH-P_x、MDA研究发现,感染鸡SOD、GSH-P_x明显低于对照鸡,MDA的含量显著增加,表明在CAV致病过程中机体内抗氧化系统受到损害,机体清除自由基能力下降。3.对1日龄SPF雏鸡感染CAV后血液中一些与机体抗氧化功能密切相关的微量元素检测发现,感染鸡血液内Se和全血中Cu、Zn、Mn、Fe均有显著下降。研究结果提示感染CAV雏鸡机体的内环境发生变化,同时Se、Zn、Mn含量的降低也与SOD活性下降呈正相关。4.CAV感染4周龄SPF雏鸡后,7~21天用流式细胞记数仪检测到外周血液中CD3~+细胞明显低于对照鸡,其中7,21天有显著性差异(P<O.05),14天有极显著性差异(P<0.01),28天以后没有统计学差异(P>0.05)。CAV感染4周龄SPF雏鸡后,感染组的CD4~+T细胞明显低于对照鸡。其中7~14天有极显著性差异(P<0.01);21天时有显著性差异(P<0.05);28天以后没有统计学差异(P>0.05)。王秀荣摘要2000年5月CAV感染4周龄SPF雏鸡后,感染组的CDS”T细胞明显低于对照鸡,其中7,28无有显著性差异(P<0刀5);1个刀天时有极显著性差异(P<0刀5)。CAV感染 4周龄 SPF雏鸡后,14-21天感染组的 Y 6 T细胞明显低于对照鸡,其中14天有显著性差异(P<0刀5):ZI 天时有极显著性差异(P<0刀1);其它检测时间感染组与对照组之间差异不显著。上述研究结果表明,CAV对感染鸡的T细胞有损伤作用,这种损伤作用是针对多种T细胞表面抗原的,而不是仅仅破坏或抑制某一种T细胞表面抗原的表达。5.CAV感染4周龄SPF雏鸡后,感染鸡胸腺内CD3”、CD4”、CDS”、Y盯细胞均有明显减少,CD31细胞在不同时期内大约减少50%左右;CD4“、CDS“T细胞受损较为严重,尤其是皮质区CD4“或CDS+T细胞几乎完全枯竭,仅残存网状结构:同时Y6T细胞也明显减少。结果表明,**V主要损害幼稚型T细胞亚群,对成熟T的损害作用较幼稚型T细胞弱,这一结果符合己有的研究结论。6.CAV感染 4周龄 SPF雏鸡后,感染鸡脾脏内 CD3+、CD4”、CDS”、Y 6 T细胞有明显减少,感染后7天就可以检测到CD31细胞在不同时期内大约减少50%左右:携带不同表面抗原的T细胞明显少于对照组织切片,感染后14天这种变化最为明显,ZI,28天时略有好转,但仍少于对照组织。结果表明,CAV不仅可以破坏细胞中枢免疫器官内携带不同表面抗原的T细胞,对外周免疫器官内的T细胞亚类同样具有感染破坏力。7.CAV感染4周龄SPF雏鸡后,用鼠抗鸡IgG抗体标记脾脏和法氏囊内的IgG抗体生成细胞,再用兔抗鼠IgG-Hny结合,最后采用DAB显色,间接检测到CAV感染后14天脾脏内IgG抗体生成细胞明显低于对照鸡,统计学差异显著p<0刀5),ZI天以后有恢复趋势,统计学差异不显著。CAV感染4周龄SPF雏鸡后,法氏囊内IgG抗体生成细胞在感染后14~xl天明显低于对照鸡,统计学差异显著或极显著(P<0刀5,P<0刀1)。结果表明,CAV不仅引起T细胞数量降低,使感染鸡细胞免疫受到抑制,同时也引起B细胞数量减少,对体液免疫机能产生负作用。……   
[关键词]:鸡传染性贫血病;ELISA;IFA;PCR;抗氧化功能;T细胞亚群;IgG抗体生成细胞
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:东北农业大学2000年