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柑橘黄烷酮在牙本质粘接耐久性方面的相关作用研究

刘正雅

  目的:混合层中牙本质胶原的降解是导致树脂-牙本质粘接界面破坏的主要原因。保护混合层中裸露的胶原纤维,是提高牙本质粘接界面稳定性的有效途径。有研究结果显示柑橘黄烷酮类物质能够抑制胶原降解、保持胶原稳定,提示其应用于稳定牙本质粘接界面的可行性。柑橘黄烷酮种类多样,研究柑橘黄烷酮在稳定胶原纤维方面的构效关系,分析甲基化、糖苷化对其胶原稳定作用的影响,寻找最优物质用以提高牙本质粘接耐久性。本研究的内容包括检测三种柑橘黄烷酮桔皮素(Hst)、桔皮苷(Hsd)、柚皮素(Nge)对游离型和结合型胶原酶活性的影响,分析其抑制胶原酶活性的功能基团;柑橘黄烷酮处理完全脱矿的牙本质胶原,观察胶原生物及理化性能的变化,分析柑橘黄烷酮对牙本质胶原结构的影响,探索其保护胶原的机制,为临床改善牙本质粘接的长期稳定性开辟新的思路。方法:1.荧光定量法检测三种物质Hst、Hsd、Nge对游离型胶原酶活性的影响,分析甲基化、糖苷化等结构对其酶抑制效能的影响,寻找其抑制酶活性的功能基团和可能机制。2.柑橘黄烷酮处理脱矿的牙本质胶原,老化15天后检测胶原纤维的干重质量变化、羟脯氨酸(HYP)释放量;透射电镜(TEM)观察胶原纤维形态结构变化;原位明胶酶实验进一步评价柑橘黄烷酮对牙本质基质中结合型MMPs活性的影响。3.500μg/m L的Hst、Hsd、Nge处理完全脱矿的牙本质胶原60 min后检测胶原的弹性模量、吸水率、胶原酶降解后HYP的释放量,分析柑橘黄烷酮对牙本质胶原的机械性能和耐酶解性能的影响;衰减全反射-傅里叶红外光谱(ATR-FTIR)检测柑橘黄烷酮处理前后牙本质胶原的结构变化;柑橘黄烷酮处理脱矿的牙本质表面,吹干后在扫描电镜下观察胶原纤维网的形态。结果:1.三种柑橘黄烷酮Hst、Hsd、Nge均能抑制游离型胶原酶的活性。抑制作用随着浓度升高而增强,当浓度达到500μg/m L时抑制比例达到90%以上,三者的抑制程度无统计学差异。2.与对照组相比,老化15天后,柑橘黄烷酮处理组的牙本质胶原干重缺失比例、HYP释放量减少,胶原纤维结构更完整;激光共聚焦检测柑橘黄烷酮处理组的荧光释放强度降低,这些结果显示Hst、Hsd、Nge对结合型MMPs具有抑制作用。三者的抑制程度无统计学差异。3.脱矿的牙本质胶原经过Hst、Hsd、Nge处理后,牙本质胶原的弹性模量增强、吸水率降低,胶原酶浸泡后HYP释放量降低,各组之间无统计学差异;ATR-FTIR结果显示,三种物质处理后,牙本质胶原的三维结构未发生明显变化;扫描电镜结果显示,脱矿的牙本质表面经过柑橘黄烷酮处理并吹干后,暴露的牙本质胶原仍能保持原有的网状结构。实验结果表明柑橘黄烷酮能够通过对牙本质胶原的生物改性增强胶原自身的抗酶解性能,达到稳定胶原的目的。综上所述,柑橘黄烷酮能够抑制MMPs活性并且可以对牙本质胶原进行生物改性,保护胶原不被酶降解,提示柑橘黄烷酮具有改善牙本质粘接耐久性的潜力。……   
[关键词]:柑橘黄烷酮;牙本质粘接耐久性;胶原;基质金属蛋白酶抑制剂;生物改性
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中国人民解放军空军军医大学2018年