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新疆北疆边境地区蚤种的鉴定与病原检测

赵姗姗

  目的:对新疆北疆边境地区蚤类(包括部分南疆蚤类)进行鉴定和病原检测,为新疆蚤传病的发生做出风险评估以及蚤传病的预防奠定基础。除此以外,对温泉县鼠疫疫源地所收集的样本及所有蚤类进行鼠疫筛查与分型,为追溯鼠疫的主要宿主、媒介及其生态地理景观的生物学类型提供科学依据。方法:1.2015-2016年在新疆北疆边境地区(布尔津县、阿拉山口市、温泉县、精河县、霍城县、察布查尔锡伯自治县和新源县)及和田地区民丰县收集哺乳动物体表寄生蚤;通过形态学及分子生物学(18S r DNA,28S r DNA,EF1-a,COII和COI),对所收集的蚤进行蚤种鉴定并进行基因系统发育分析。2.选取阿拉山口地区的长吻角头蚤、臀突客蚤、叶状切唇蚤突高亚种、后弯怪蚤及秃病蚤指名亚种组织DNA送至北京诺禾致远生物信息科技有限公司,对细菌16S r DNA基因序列中的V3-V4可变区进行测序,分析其细菌的群落结构、种群多样性及丰富度。3.结合宏细菌数据,对所采集蚤类样本进行立克次体(MLST)、沃尔巴克体(wsp和16S r RNA)以及巴通体(glta、ITS和rib C)的筛查,阳性片段进行克隆测序分析并构建遗传进化树,进行系统发育分析。4.收集温泉县动物血清、组织样本以及采集点的蚤类样本,采用间接血凝法对血清样本进行鼠疫血清学F1抗体监测,采用PCR检测技术对组织样本进行鼠疫(caf1和pla)筛查并且对阳性样本进行MLVA基因型的分析。结果:1.2015-2016年共收集蚤类样本5699匹,隶属于7科16属19种,分别为:长吻角头蚤、人蚤、同型客蚤指名亚种、臀突客蚤、印鼠客蚤、猫栉首蚤指名亚种、叶状切唇蚤突高亚种、宽新蚤、修长栉眼蚤指名亚种、宽臂纤蚤、八栉蝠蚤、林野细蚤、真凶中蚤精河亚种、似升额蚤指名亚种、后弯怪蚤、谢氏山蚤、方形黄鼠蚤七河亚种、秃病蚤指名亚种和花蠕形蚤;阿拉山口地区鼠体外寄生蚤季节变化显示,蚤类除1-2月份蚤指数低,其余10个月蚤指数较高且呈现一定的波动性。2.阿拉山口地区5种蚤中共测得726626条Tags被分成5447个OTUs,分析发现绝大多数的细菌分属于4个细菌门:放线菌、拟杆菌、厚壁菌和变形菌,丰度呈现明显差异性。3.立克次体:民丰县的花蠕形蚤中检测到暂定的巴贝瑞立克次体(Candidatus Rickettsia barbariae);阿拉山口地区的臀突客蚤、长吻角头蚤和后弯怪蚤中检测到与贝利立克次体(R.bellii)亲缘性较高的立克次体,在宽臂纤蚤和秃病蚤指名亚种检测到更为古老的立克次体。沃尔巴克体:在人蚤、客蚤、猫栉首蚤指名亚种、似升额蚤、后弯怪蚤、谢氏山蚤、方形黄鼠蚤七河亚种和秃病蚤指名亚种中均检测到,分子学分析显示该内共生体与以往在蚤内报道存在较大差异性。巴通体:在阿拉山口地区的5种及温泉与精河地区的3种蚤类中检测到巴通体:1)臀突客蚤和同型客蚤指名亚种中检测到Bartonella rochalimae;2)在臀突客蚤中检测到格拉范姆(B.grahamii);3)叶状切唇蚤突高亚种、后弯怪蚤和秃病蚤指名亚种检测到伊丽莎白(B.elizabethae);4)来自温泉县与精河县长尾黄鼠体外的似升额蚤和方形黄鼠蚤七河亚种中BZ01与来自温泉县旱獭体外的谢氏山蚤中的巴通体BZ02聚为一支且都与B.washoensis聚为一大支。4.2015年温泉县收集的血清学阳性率分别为灰旱獭2.1%(1/47)、牧羊犬6.7%(2/30)、长尾黄鼠0.7%(1/134);分子学检测发现仅在温泉县的谢氏山蚤及灰旱獭脏器中检测到鼠疫核酸阳性,且MLVA类型均为MT86(2-2-2-4-6-8-7-5-2-7-3-3-2-5)。结论:1.采集的19种蚤,叶状切唇蚤突高亚种、修长栉眼蚤指名亚种、宽臂纤蚤、八栉蝠蚤、真凶中蚤精河亚种、似升额蚤指名亚种、后弯怪蚤、谢氏山蚤、方形黄鼠蚤七河亚种和花蠕形蚤5对基因信息及长吻角头蚤(28S r DNA,COII,EF1-a,COI)、臀突客蚤(18S r DNA,28S r DNA和EF1-a)和秃病蚤指名亚种(18S r DNA,28S r DNA和COI)均为首次上传Gen Bank,丰富了数据库的信息并为以后的研究提供便利。2.宏细菌研究发现蚤类菌群中存在大量致病菌和条件致病菌属,提示我们在后续的研究调查中,有针对地筛查该地区的致病性病原,为该地区风险作出评估与预警。3.在蚤种和地区上,蚤类的立克次体、沃尔巴克体和巴通体的检测均为首次发现,并且巴通体均为致病性,提示在这些地区和蚤种中应引起高度重视。4.在阿拉套山和别珍套山又发现了2个新的鼠疫阳性监测点,显示该区鼠疫疫情仍在活跃,其范围有扩大的趋势,应高度警惕其向人间的传播。……   
[关键词]:;鼠疫;宏细菌;立克次体;沃尔巴克体;巴通体
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:石河子大学2017年
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