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瑞香狼毒根提取物杀虫活性成分分离及鉴定

张等宏

  瑞香狼毒(Stellera chamaejasme L.)是一种草本植物,具有高度的竞争性和广泛的生态适应性,成为中国草地上持久性的杂草问题,其根有毒,严重影响放牧,破坏草原生态,但是对多种农业害虫具有较好的生物活性,可以作为植物源农药加以利用开发。本文以瑞香狼毒根为材料,用乙醇提取物及4种不同溶剂的萃取物对截形叶螨、二斑叶螨、豌豆蚜、粘虫、小麦孢囊线虫等供试昆虫进行活性筛选,获得了具有较好活性的石油醚萃取物,采用活性跟踪法及现代分离鉴定技术得到了6个活性较高化合物的结构式(5个香豆素类化合物及1个甾体类化合物),用单因素方法确定了瑞香狼毒根中总香豆素化合物的提取工艺以提取条件。本文研究结果如下:1.将瑞香狼毒根乙醇提取物及4种不同溶剂萃取物对截形叶螨、二斑叶螨、豌豆蚜、粘虫、小麦孢囊线虫、菜青虫和苹果卷叶蛾进行了活性筛选。结果表明:瑞香狼毒根的乙醇提取物对截形叶螨(Tetranychus truncates Ehara,)、二斑叶螨(Tetranychus urticae Koch)、豌豆蚜(Acyrthosiphon pisum)、粘虫(Mythimnaseparata walker)、菜青虫(Pieris rapae Linne)、苹果卷叶蛾(Pandemis heparana)和小麦孢囊线虫(Cereal cyst nematode)处理24 h的校正死亡率分别为66.75%、61.45%、65.53%、100%、100%、9.32%和12.12%;石油醚萃取物对对截形叶螨、二斑叶螨、豌豆蚜、粘虫和菜青虫处理24 h后的校正死亡率分别为93.33%、84.19%、100%、100%和100%;氯仿萃取物处理24 h后对截形叶螨、二斑叶螨和豌豆蚜的校正死亡率分别为34.47%、35.95%和38.60%,对粘虫和菜青虫则无明显活性,石油醚萃取物对截形叶螨12 h和24h的LC50分别为2.04 mg/mL和0.8 mg/mL;对二斑叶螨12 h和24 h的LC50分别为0.28mg/mL和0.037 mg/mL;对豌豆蚜12 h和24 h的LC50分别为0.9114 mg/mL和0.3605mg/mL,24 h毒力均高于12 h毒力,石油醚萃取物浓度低于200 mg/mL时对粘虫和菜青虫触杀作用不明显。2.用活性跟踪法分析了其中的活性化合物成分,得到了5种香豆素类活性化合物和1个甾体化合物,通过核磁共振波谱学数据解析,确定6个化合物结构为:β-谷甾醇、伞形花内酯、东莨菪素、瑞香素、东莨菪内酯、瑞香苷,并对截形叶螨、二斑叶螨和豌豆蚜进行了室内毒力测定。结果表明:6个化合物对截形叶螨及二斑叶螨均有一定的触杀活性,其中化合物1、4、6对截形叶螨、二斑叶螨具有较强的触杀活性,800μM的化合物1、4、6在24 h对截形叶螨的校正死亡率分别达到了45.21%、52.54%和76.49%,LC50分别为0.9417、0.6330、0.3146 mM,对二斑叶螨的校正死亡率分别达到了53.16%、62.53%和72.24%,LC50分别为0.6472、0.5265、0.3742 mM。3.本文以活性化合物瑞香苷为标准化合物,绘制了瑞香狼毒中总香豆素的标准曲线,采用乙醇为提取溶剂,对冷浸、热回流、超声波辅助提取法比较发现,超声提取效果最好,因此用单因素法对超声辅助提取条件进行了选择,考察了提取溶剂、温度、时间、料液比对总香豆素提取的影响,确定了最佳单因素条件:乙酸乙酯作为提取溶剂,温度55℃,提取40 min,料液比15:1。用大孔吸附树脂对提取物进行了纯化,AB-8型树脂纯化效果最好,50%乙醇洗脱液对香豆素的纯化效率可达90%以上。4.以5个香豆素化合物为化感活性物质,莴苣为受体,采用实验室活体生物实验方法研究了5个化合物对莴苣的化感作用。结果显示,5个化合物对莴苣幼苗的生长均有不同程度的化感活性,其中以化合物伞形花内酯、瑞香素抑制作用最强。同时采用植物细胞和生理学方法,研究了化合物2、4对莴苣的化感作用途径,明确了在高浓度化感物质的胁迫作用下,致使受体植物体内活性氧发生积累,导致MDA含量升高,细胞活力降低,最终影响莴苣幼苗的生长发育。……   
[关键词]:瑞香狼毒;根提取物;杀虫活性;活性跟踪法;超声辅助提取法;香豆素提取工艺;化感作用
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:甘肃农业大学2016年