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核壳型抗EV71免疫球蛋白(IgY)微胶囊的制备及性能研究

吴晓忠

  肠道病毒71型(Enterovirus type71, EV71)是小型RNA病毒科肠道病毒属成员,其感染性强、致病率高,是导致手足口病的主要病原,同时能引起多种与神经系统相关的疾病。目前针对肠道病毒71型感染多采用抗生素进行治疗,导致病毒耐药性不断增加。口服特异性卵黄免疫球蛋白(Egg yolk immunoglobulin, IgY)可治疗由细菌或病毒引起的肠道疾病,具有安全无残留、不产生抗药性、服用简便等优点,是一种具有广阔应用前景的抗生素替代品。但IgY在高强度的胃酸环境中易被胃蛋白酶降解,失去抗体活性。因此,如何避免IgY在胃中失活,而在小肠中稳定地发挥作用,是一个亟待解决的问题。针对这一问题,本论文采用层层自组装微囊化技术包埋IgY。以IgY为晶体生长调控剂制备含IgY的碳酸钙微球,并以此作为模板核,在其表面层层组装聚赖氨酸(PLL)和聚谷氨酸(PGA)。用乙二胺四乙酸二钠(EDTA)溶去碳酸钙后,得到内部填充IgY的微胶囊。 本论文以IgY为晶体生长调控剂合成CaCO3(IgY)粒子,考察了IgY浓度对微粒的形貌和包裹率的影响,同时考察了沉积反应时间对CaCO3粒子形貌的影响,实验表明在IgY浓度为1.0mg/mL、沉积反应时间为30min的实验条件下可得到表面光滑粒径均一的碳酸钙微球。然后,采用扫描电子显微镜、荧光显微镜、粒度分析仪、热重分析仪对合成的碳酸钙微球的掺杂形式及形貌、粒径分布、IgY含量进行了表征。实验结果表明,合成的碳酸钙微球为表面光滑无突起,粒径分布均匀,主要在5-8μm之间,单分散性好,可作为层层自组装微胶囊制备过程中的模板核心。 为制备核壳结构微球,以碳酸钙微球为核心,以聚阳离子电解质PLL和聚阴离子电解质PGA为壁材,利用层层自组装法得到了核壳结构微球。采用扫描电子显微镜、荧光显微镜和zeta电位分析仪对核壳结构粒子形貌进行表征,证实了该粒子的核壳结构。通过EDTA-Na将碳酸钙模板去除后,得到内含IgY的聚多肽微胶囊。进一步探讨了微胶囊对IgY的释放行为的影响。其结果表明中空微胶囊对IgY的释放有一定的延缓作用,随着微胶囊包裹的层数增加,延缓释放效果更佳。在体外实验中,IgY和IgY微胶囊都能抑制病毒,表明IgY经微胶囊包裹后,生物免疫活性没受影响。在体内动物实验中,口服IgY微胶囊治疗后病情很快得到控制。通过组织切片和组织病毒检测结果可知,IgY微胶囊对小鼠的治疗效果明显好与IgY治疗效果。由此可见,IgY经聚多肽微囊包埋后,经胃酸和胃蛋白酶环境其抗体活性受到保护,并且可于小肠中定点释放,能有效治愈EV71感染鼠。 综上,本研究制备的IgY微囊,作为一种新型的口服防治病菌产品,将具有良好的产业化前景,也为其他口服生物活性物质的控释制剂开发奠定了基础。……   
[关键词]:肠道病毒71型;卵黄抗体;聚多肽;药物控释;微胶囊
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:广东工业大学2014年