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安泰口服液对荷瘤小鼠白细胞减少症及免疫功能影响的实验研究

付善灵

  目的:肿瘤是全世界首要的死因之一,我国每年恶性肿瘤新发病例约160万,死亡大约130万,现有病人200多万人,肿瘤给家庭和社会带来了沉重的灾难和无法估测的人力、物力、财力的巨大损失。中医药在防治放、化疗的毒副反应,提高机体的免疫力、防止肿瘤复发转移、改善生活质量、延长生存期等具有独特的优势。我们应用中国中医科学院开发的“中医辅助传承系统”,建立了中医肿瘤辅助传承数据库,在数据库中纳入了对中药辅助肿瘤放、化疗有效的97个方剂,利用系统软件分析获得一个新的处方。在此基础上结合导师多年临床经验总结的自拟方组成安泰口服液A方药和B方药。在对A方药的实验研究中,已证明其对荷瘤小鼠具有抑瘤及延长生存期的作用。本实验将进一步研究安泰口服液A方药和B方药对升高荷瘤小鼠白细胞及免疫调节影响的作用,以此得到最佳组方的安泰口服液方药,从而为安泰口服液的临床推广运用提供基础研究资料。 材料与方法: 1材料:健康昆明种小鼠、雌雄各半、体重18-22g、S180瘤珠、环磷酰胺、肝素钠注射液、印度墨汁、722分光光度计、BC3000全自动血液细胞分析仪、MODEL DS-671型号电子秤,药物:安泰口服液A方组补骨脂薏苡仁黄芪白术半夏陈皮茯苓等, B方组黄芪女贞子白花蛇舌草党参等。 2方法: 2.1造模: 2.1.1肿瘤模型的建立:从已接种7天且肿瘤生长良好的S180腹水型荷瘤小鼠腹腔抽吸乳白色浓稠的腹水,与生理盐水按1:3的比例进行稀释,并用血球计数板计数肿瘤细胞,调整细胞数为1×107个/ml,制成肿瘤细胞悬液。瘤株接种前,均用0.2%台盼蓝染色,计数活细胞率>95%。在小鼠右前腋下皮下注射0.2mlS180细胞悬液(约2×106个细胞),制成实体瘤模型。 2.1.2骨髓抑制模型建立:对A方组、B方组和模型组的荷瘤小鼠腹腔注射环磷酰胺,每只荷瘤小鼠腹腔注0.2ml,100mg/kg,连续3天,注射环磷酰胺而导致荷瘤小鼠骨髓抑制模型。 2.2动物分组:昆明种小鼠随机分成4组,每组10只,雌雄各半。分别为:对照组、模型组、A方组、B方组。除对照组,其余3组均为荷瘤S180小鼠。 2.3动物给药: A方组给予荷瘤小鼠A方药0.4ml/只/日(含生药2.85g/ml)B方组给予B方药0.4ml/只/日(含生药1.45g/ml)灌胃,对照组、模型组均都给予等量的生理盐水0.4ml灌胃。 2.4安泰口服液升高白细胞作用实验:给予因注射环磷酰胺而引起骨髓抑制的荷瘤小鼠A方组、B方组、模型组,及对照组连续灌胃10天。末次给药后24h,从小鼠内眦静脉丛采集血液标本,检测外周血液白细胞计数。 2.5单核-吞噬细胞实验:连续灌胃10天。末次给药后24h,记录小鼠体重,按10m1/kg尾静脉注射稀释的印度墨汁,2min和10min后分别从小鼠内眦静脉丛取血20ul,溶于2ml0.1%Na2CO3溶液中摇匀,置722型分光光度计600nm波长处测定吸收度(OD)值。称取小鼠体重,颈椎脱臼处死,分别称取脾、肝脏重量,计算廓清指数K和吞噬系数α,K=(logOD1-logOD2)/(t2-t1),吞噬系数α=K1/3×体重/(肝重+脾重)。 2.6迟发型变态反应(DTH)实验:除对照组外,其余3组(A方组、B方组、模型组)荷瘤小鼠采用足跖增厚法,即给小鼠腹腔注射2%(v/v)绵羊血红细胞(SRBC),0.2mL/鼠(约1×108个SRBC)致敏后4d,测量左后足跖厚度,然后在测量部位皮下注射20%(v/v)SRBC,20ul/鼠(约1×108个SRBC)于注射后24h测量左后足跖部厚度,同一部位测量3次,取平均值。以攻击前后足跖厚度差值(足跖肿胀度)来表示DTH的程度。 结果: 1.从安泰口服液升高白细胞作用的实验可见:用药第10天后安泰口服液A方组白细胞计数为5.7±0.3,B方组为5.6±0.5,模型组白细胞计数为2.9±0.6,对照组白细胞计数为7.6±0.6。与模型组比较,安泰口服液A方组和B方组白细胞计数均有显著性差异(P<0.01);A方组与B方组比较无显著性差异(P>0.05)。 2从单核-吞噬细胞实验可见:用药后,安泰口服液A方组的廓清指数为0.213±0.028、吞噬系数为5.18±0.47;安泰口服液B方组的廓清指数为0.144±0.032、吞噬系数为4.25±0.65;模型组的廓清指数为0.107±0.014、吞噬系数为3.22±0.67;对照组廓清指数为0.251±0.042、吞噬系数为5.67±0.54;安泰口服液A方组和B方组的廓清指数和吞噬系数与模型组、空白组比较均有显著性差异(P<0.05);A方组和B方组与模型组比较均能提高荷瘤小鼠的廓清指数和吞噬系数;A方组和B方组比较,廓清指数、吞噬系数具有显著性差异(P<0.05),A方组在提高免疫功能要优于B方组。 3从迟发型变态反应(DTH)实验可见:用药后A方组足跖厚度差为0.48±0.17;B方组足跖厚度差为0.41±0.14;模型组足跖厚度差为0.36±0.16;对照组足跖厚度差为0.23±0.11;安泰口服液的A方组和B方组与对照组,模型组比较,具有显著性差异(P<0.05)。A方组与B方组比较有明显差异(P<0.05)。 结论: 1由安泰口服液升高白细胞作用实验可见:安泰口服液A方组和B方组均可以改善荷瘤S180小鼠由于注射环磷酰胺引起的白细胞减少症状。 2由单核-吞噬细胞实验结果可见:安泰口服液的A方组和B方组均可显著增强荷瘤S180小鼠非特异性免疫功能。但A方组与B方组比较,A方组作用更明显。 3由迟发变态反应的结果可见:安泰口服液的A方组和B方组均能提高S180荷瘤小鼠的特异性免疫功能,但A方组与B方组比较,A方组疗效优于B方组。综上:安泰口服液A方是导师临床验方结合“中医辅助传承系统”总结方化裁出的最佳方剂,可以改善环磷酰胺引起的细胞免疫损伤及白细胞减少症状,使免疫损伤小鼠的细胞数目增加,增强细胞的应答能力,对机体低下的细胞免疫具有恢复作用。……   
[关键词]:安泰口服液;恶性肿瘤;骨髓抑制;免疫功能
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:辽宁中医药大学2012年