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温肾方对亚临床甲减大鼠血管损伤的影响的实验研究

潘立文

  目的:观察温肾方对亚临床甲减大鼠血管损伤的影响并探讨造成这种影响的机理; 方法:将健康6周龄SPF级Wistar大鼠50只随机抽取8只设为正常对照组。而将正常对照组以外的大鼠行“甲状腺全切+术后皮下注射L-T4”法制备亚临床甲减大鼠模型,造模成功后将这些大鼠随机分为模型组,中药小剂量组,西药组,中药大剂量组。然后对此四组的大鼠行连续30天的灌胃治疗,然后 1.采用化学发光法检测大鼠血清甲功三项的含量,采用Elisa法检测肝脏组织TT3的含量; 2.运用东芝DBA-120型全自动生化分析仪对所有实验大鼠的血脂四项(TC、TG、LDL-C、HDL-C)的浓度进行检测; 3.对大鼠的肝组织中HMG-CoA还原酶及血清中MCP-1, ET-1的水平采用Elisa法进行检测; 4.取出大鼠胸主动脉2cm,匀浆,取其上清液,提取总RNA,利用RT-PCR技术进行基因片段的体外扩增,扩增产物通过电泳后,通过对其电泳照片上灰度值进行检测,比较其LOX-1mRNA的相对含量; 5.于灌胃结束后的第二天在实验大鼠身上取材,取出大鼠胸主动脉标本,制备病理标本,通过光镜和电镜观察实验大鼠胸主动脉显微结构与超微结构; 结果:1.与正常组比较,模型组大鼠血清TSH水平明显升高(P<0.01)。与模型组比较,中药小剂量组TSH水平较明显降低(P<0.05);西药组TSH水平明显降低(P<0.05);中药大剂量组TSH水平明显降低(P<0.05)。各组之间FT3, FT4水平无明显差异(P<0.05)模型组肝脏TT3含量,与正常组比较,有明显降低(P<0.05);中药大剂量组,中药小剂量组,西药组肝脏TT3含量均较模型组明显提高(P<0.05),而其中尤以中药大剂量组的提高最为明显; 2.中药大剂量组,与对照组比较,血浆TC, TG, LDL-C, HDL-C水平没有明显差异(P>0.05);,与中药小剂量组比较,血脂四项的水平没有明显差异(P>0.05);与西药组比较,没有明显差异(P>0.05);与模型组比较,则TC, TG, LDL-C水平明显降低(P<0.05), HDL-C水平明显提高(P<0.05)。模型组,与对照组比较,TC, TG, LDL-C水平明显升高(P<0.05),而HDL-C水平明显降低(P<0.05); 3.实验结果通过统计学处理之后,发现中药大剂量组,与对照组比较,肝脏HMG-CR以及血清MCP-1, ET-1的水平没有明显差异(P>0.05);与中药小剂量组比较,肝脏HMG-CR以及血清MCP-1, ET-1的水平没有明显差异(P>0.05);与西药组比较,则没有明显差异(P>0.05);与模型组比较,则肝脏HMG-CR以及血清MCP-1, ET-1水平明显降低,有明显差异(P<0.05)。 4.对空白对照组,中药大剂量组,西药组,中药小剂量组,模型组的大鼠血管LOX-1的mRNA的RT-PCR产物进行电泳后。通过对其中心区域的灰度值进行扫描分析,然后分别将对应组别自己的LOX-1的mRNA的电泳产物与自己所属的组别的beta-Actin的mRNA的电泳产物的灰度值进行比较,计算两者之间数值的比值。结果显示,与正常对照组比较,模型组的LOX-1的mRNA的相对含量明显上升(P<0.05);与模型组的LOX-1的mRNA的相对含量比较,中药大剂量组,西药组,中药小剂量组的LOX-1的相对含量均下降明显(P<0.05),而特别是以中药大剂量组的下降最为明显; 5.显微结构方面主要表现在动脉内膜失去光滑状态,内皮细胞受到损伤,排列失去正常的秩序,内皮细胞间隙增宽,单核巨噬细胞的浸润,泡沫细胞的形成,平滑肌细胞的变形,增生;在超微结构层面则表现为内皮细胞的损伤,结构异常,胞膜失去光滑平整的状态,细胞内线粒体肿胀,粗面内质网减少,细胞胞质显清稀,内皮细胞间隙扩大,可见单核巨噬细胞浸润等异常表现;通过中药小剂量干预后,大鼠血管病变的程度可见明显变轻,且随着温肾方剂量的提高,亚临床甲减大鼠血管病变的情形明显减轻,而且较之西药治疗组而言,还能够体现出其对于纠正亚临床甲减大鼠血管病变的优势。 结论:采取“甲状腺全切+每日皮下注射L-T4”这种造模方法可以成功制备SCH模型大鼠。运用这种方法制备的SCH模型大鼠,外周组织处于低T3的组织甲减状态,而肝组织中的HMG-CoA还原酶的含量偏高,由于肝脏高HMG-CoA还原酶水平以及组织低T3状态导致SCH模型大鼠的高TC, LDL-C尤其是高OX-LDL水平的血脂紊乱状态,从而发生对于血管内皮的脂毒性作用,即对于血管内皮细胞的直接损伤;而这种损伤引起的ET-1, MCP-1等又反过来加重血管病变,形成较为严重的血管病变;通过温肾方干预SCH大鼠后,发现温肾方确实能够改善实验大鼠的SCH状态,提高外周组织T3的利用率,调整血脂紊乱状态,尤其是降低OX-LDL的水平,从而缓解对于血管内皮的直接损伤以及由之引起的继发性血管病变,这种疗效是明显的,而且相较于西药组在改善血管内皮损伤,减轻血管病变方面,中药组尤其是中药大剂量组效果更加突出。这就为在临床上推广运用温肾方提供了动物实验的证据和基础。……   
[关键词]:温肾方;亚临床甲减;血管损伤;中医药
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:湖北中医药大学2012年
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