手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

疯草内生真菌种属鉴定及次生代谢产物研究

陈基萍

  为探明我国西部草地主要疯草内生真菌的种类及其分布,以及疯草内生真菌抑菌活性次生代谢产物的化学组成和开发前景,本研究以采自青海和内蒙古草地的小花棘豆、黄花棘豆、甘肃棘豆、急弯棘豆、兰花棘豆和变异黄芪为研究对象,运用表面消毒法对疯草各组织(根、茎、叶、花和种子)进行内生真菌的分离纯化;结合传统形态学和现代分子生物学rDNA-ITS序列分析技术鉴定疯草内生真菌的属种,NJ法构建系统发育树并分析其亲缘关系;以金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌和沙门氏菌为测试病原细菌,用纸片法对内生真菌次生代谢产物进行抑菌活性筛选;最后对目标菌株大批量发酵培养,分离、纯化次生代谢产物的化学成分。取得如下成果: 1.本研究从我国6种主要疯草中分离获得265株内生真菌,经鉴定为38个种,其中30种分属12科19属,8种未确定科。镰刀菌属、链格孢属和拟青霉属是优势种群,分别占总菌株的16.98%、11.32%和9.81%;系统发育分析显示,38种疯草内生真菌主要分为两大类群,绝大部分菌株之间具有较高亲缘关系,仅少数亲缘关系偏低、可能是个别菌株在长期进化过程中发生某些变异以适应疯草宿主体内环境所致。疯草内生真菌亲缘关系的远近受疯草种类、部位及生态环境等多种因素的影响。 2.抑菌试验结果表明,38种内生真菌中有29种的次生代谢产物对至少1种测试病原菌有抑菌活性,占全部菌株的76.32%。其中,27种对金黄色葡萄球菌具有抑制作用,20种对枯草芽孢杆菌具有抑制作用,20种对大肠埃希菌具有抑制作用,9种对沙门氏菌具有抑制作用,分别占总分离菌株的71.05%、52.63%、52.63%和23.68%。抑菌效果显著的有XJ-JJ-1(毛壳菌属),XJ-JJ-2(炭角菌属),XJ-JJ-5(镰刀菌属),XJ-ZJ-2(镰刀菌属),GJ-JQ-2(梭孢壳属),GBQ-3(镰刀菌属)和GGJ-Y-1(裂褶菌属),其代谢产物均具有广谱抑菌性,其中XJ-JJ-2和XJ-ZJ-2的次生代谢产物抑菌效果最为明显,对4种测试病原菌均有较强的抑制作用。 3. GC-MS分析结果表明,发酵液和菌丝体中分别鉴定出36个和42个单体化合物,相对含量大于1%的化合物均为10个,有机酸为主要成分。进一步分析可知,两个部分相同的化合物有11个,但相对含量大于1%的相同化合物仅占3个,其中菌丝体还含有2个相对含量分别为15.474%和8.424%的未知化合物,发酵液和菌丝体中的成分存在较大的差异。代谢产物的硅胶柱层析分离、纯化仍在进行,目前已从一号硅胶柱层析中获得2个单体化合物,抑菌活性追踪和结构鉴定有待进一步分析。……   
[关键词]:疯草;内生真菌;次生代谢产物;抑菌活性;有机酸
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:西北农林科技大学2012年