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升丹制剂—五五丹外用对大鼠的肾毒性及毒性机制研究

李永刚

  目的基于中医理论,在前期研究的基础上,根据临床用药模式,考察五五丹的毒性及其毒性机制,为临床的安全用药提供科学依据,进而构建符合中医临床特色的安全性评价模式。 方法通过对破损皮肤模型大鼠连续给予五五丹4周及停药1周的毒性特征研究以及TUNEL法、免疫组织化学法等研究五五丹对肾脏细胞凋亡的影响,并进一步检测细胞凋亡过程中Bax/Bcl-2、信号转导(NF-κB)等相关蛋白表达变化以揭示其作用机理,为临床安全用药提供安全依据。 结果五五丹高、中、低剂量组在给药第7、21、28天时均引起大鼠肾脏系数显著增加(*p<0.05,**p<0.01)。五五丹高剂量组在给药第7、28天时均引起大鼠胸腺系数显著下降(**p<0.01)。五五丹高剂量组在给药第14天时引起大鼠谷丙转氨酶(’p<0.05)及谷草转氨酶(”p<0.01)水平明显升高。五五丹高剂量组在给药第28天时引起大鼠尿素氮(”p<0.01)水平明显升高。 五五丹大剂量应用后大鼠肾脏主要表现为肾小管腔明显扩张,上皮细胞明显变性、坏死,多数大鼠。肾小球无明显改变。高剂量对肾脏的毒性作用1-2周时最明显,以后随着用药时间的延长,毒性作用反而有所减轻。4周时肾脏的病变最轻,在恢复期出现修复性改变(肾小管再生)。对卵巢、子宫有一定的毒性作用,对睾丸生精有抑制作用。高剂量1周时引起皮质部胸腺细胞坏死,2周~4周胸腺有轻度~中度萎缩,恢复期病变明显减轻、胸腺的组织形态学结构基本恢复正常。五五丹高剂量对肾脏组织的凋亡诱导作用1-2周时最明显,以后随着用药时间的延长,毒性作用减轻。五五月在用药4周,停药恢复1周后,肾脏组织的凋亡程度明显减轻。 五五月外用1-2周时即可引起Bax表达水平显著性升高,同时Bcl-2表达水平明显下降(*p<0.05或**p<0.01),以后随着用药时间的延长,其对Bax及Bcl-2蛋白表达的影响明显减弱。 五五丹外用1-2周时即可引起NF-κB表达水平显著性升高(**p<0.01),3-4周时仍处于较高水平,5周时NF-K B表达水平明显下降。 结论1.五五丹大剂量应用对大鼠脏器有明显的毒性表现。肾脏发生损害的形态学改变,主要表现为肾小管改变而多数大鼠肾小球无明显改变。肝脏的功能虽受到损害,但肝脏的病理组织学改变却不显著。卵巢、子宫、睾丸、胸腺等器官有不同程度毒性损害。 2.五五丹对肾毒性与用药剂量呈正相关关系,即用药剂量的加大,对肾脏的毒性作用增加;五五丹对肾毒性与用药时间呈一定的相关关系,高剂量对肾脏的毒性作用1-2周时最明显,中剂量和低剂量2周时达高峰,此后减轻。五五丹在用药4周,停药恢复1周后,肾脏的病变程度明显减轻,提示在本研究所使用的剂量和时间范围内肾功能可以恢复。 3.五五丹引起的肾脏组织凋亡与用药剂量和时间有密切关系,1-2周时最明显,此后减轻。用药4周,停药恢复1周后,肾脏组织的凋亡程度明显减轻,提示在所使用的剂量和时间范围内具有一定的可逆性。 4.五五月可通过调控Bax/Bcl-2凋亡相关蛋白表达水平引起肾脏细胞凋亡,效应具有一定的剂量效应及时间效应关系,2~3周时达高峰,具有一定的可逆性。提示机体对五五丹具有一定的适应能力,可通过调节其相关代谢或增强其损伤修复功能从而使其毒性降低。 5.NF-κB参与五五丹诱导的大鼠肾脏细胞凋亡,五五丹可通过调控NF-κB凋亡相关蛋白表达水平引起肾脏细胞凋亡。毒性大,则NF-κB表达水平显著性升高。用药时间延长,对NF-κB蛋白表达的影响明显减弱。 6.推断升丹制剂的应用以不超过4周为宜。五五丹外用控制在实验的中等剂量以内,可以避免或减轻毒副作用,实验剂量的五五丹没有出现汞吸收和蓄积的中毒致死,未损害机体修复机制,推荐剂量相对安全。 7.五五丹的毒性研究意义重大。为研究毒性药物制剂对机体组织细胞凋亡的影响,构建有毒中药的安全性评价模式,提供科学研究思路。为临床规范、安全应用疗效卓著的传统药物提供依据,也为中药制剂的开发提供条件。……   
[关键词]:升丹制剂;五五丹;毒理;毒性机制
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:南京中医药大学2012年