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人参皂苷Rb1抑制自体静脉移植物内膜平滑肌细胞增生的研究

乔洪武

  背景与目的 冠脉动脉旁路移植术是治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病(Coronary Atherosclerotic Heart Disease,简称冠心病)的主要方法之一,自从Favaloro[1]首次将大隐静脉应用于冠状动脉旁路移植术以来,大隐静脉由于具有来源丰富,口径较大,易于吻合,取材容易且长度充分等特点,成为临床上主要的移植材料。但种种原因造成的移植静脉再狭窄或闭塞,使移植血管桥的使用寿命受到了一定的限制,远期疗效并不理想。一般来说远期通畅率1年约为80%,5年约为75%,以后每年的闭塞率为2-4%,10年约为50%,所以有一部分人需要接受二次手术。预防移植静脉再狭窄或闭塞成为了研究热点。人参皂苷Rbl是从人参中提取的单体化合物,是一种钙通道阻滞剂,有明显的阻滞ICa2+电流的作用,并且能明显抑制MCT(野百合碱)诱导的RVH(右心室肥大),具有抗心律失常的作用,还具有显著的抗血管内皮缺氧损伤、抗氧自由基等作用,有报道称:人参皂苷Rb1可通过减少内膜增生过程中增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,简称PCNA)及转化生长因子-β(Transforming Growth Factor-p,简称TGF-β)的基因表达进而抑制血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,简称VSMCs)的过度增殖,减少细胞外基质的形成和分泌,起到抑制内膜过度增生、减轻移植血管再狭窄的作用,延长移植静脉的使用寿命。本实验在建立兔颈外静脉-颈总动脉移植血管桥动物模型的基础上,通过腹腔注射一定剂量的人参皂苷Rb1成品,观察各组移植静脉内膜厚度和形态的变化以及PCNA与TGF-β基因表达的变化,探讨人参皂苷Rbl对移植静脉桥再狭窄或闭塞的抑制作用及其作用机理,为以后的临床应用提供实验基础和理论依据。 材料与方法 45只健康纯种新西兰大白兔,雌雄不限,随机分为实验组、模型组、对照组3组,每组15只。应用 no-touch 外科技术获取右侧颈外静脉后,离断右侧颈总动脉,采用外翻连续缝合方法端端吻合颈外静脉和颈总动脉,建立颈外静脉和颈总动脉旁路移植的动物模型。4周后,取出移植静脉血管,利用HE染色观察移植静脉血管内膜形态和厚度变化,并测量内膜厚度,计算内膜/中膜的厚度比,免疫组化观察静脉移植血管增殖细胞核抗原与转化生长因子-β阳性表达情况,RT-PCR检测移植静脉血管中PCNA及TGF-β mRNA的表达。 结果 1移植静脉HE染色结果 石蜡切片HE染色光镜下观察分析结果显示:移植4周后实验组、模型组的移植静脉内膜均有不同程度的增生重构,模型组更显著,实验组、模型组、对照组移植血管的内膜厚度分别为(41.57±2.43)μm、(73.76±7.83)μm、(11.38±0.71)gm,各组间比较P<0.05,有显著差异。三组移植静脉内膜/中膜厚度比分别为(1.21±0.09)、(1.44±0.12)、(0.28±0.07),各组间比较P<0.05,有显著差异。 2移植静脉免疫组化染色结果观察 移植4周后实验组、模型组、对照组的移植静脉内膜中均可见到PCNA、 TGF-β阳性细胞表达。实验组、模型组、对照组PCNA阳性表达指数分别是(35.24±2.31)%、(57.84±2.79)%、(14.37±1.20)%,各组间比较P<0.05;有显著差异;移植4周后实验组、模型组、对照组TGF-β阳性表达指数分别是(30.28±1.69)%、(52.43±3.85)%、(13.57±1.13)%,各组间比较P<0.05,有明显差异。 3移植静脉RT-PCR结果观察 RT-PCR结果显示各组移植静脉血管中均可见PCNA及TGF-pmRNA表达,但经人参皂苷Rb1干预后,模型组PCNA及TGF-βmRNA相对表达含量明显高于实验组和对照组,以目的基因与内参基因的积分光密度比值计算PCNA及TGF-p的相对含量;移植4周后的实验组、模型组、对照组PCNAmRNA相对含量比值分别是(0.942±0.004)、(0.756±0.003)、(0.574±0.002),各组间比较P<0.05,有显著差异;TGF-βmRNA的相对含量比值分别是(0.921±0.006)、(0.716±0.003)、(0.539±0.004),各组间比较P<0.05,有显著差异。 4相关性分析结果 SPSS简单线性模型结果显示: (1) PCNA与移植静脉再狭窄呈正相关,相关系数为0.402。 (2) TGF-β与移植静脉再狭窄呈正相关,相关系数为0.376。 结论 1. PCNA的基因表达与移植静脉再狭窄程度呈正相关。 2. TGF-β的基因表达与移植静脉再狭窄程度呈正相关。 3.人参皂苷Rb1能够抑制移植静脉PCNA与TGF-β基因的过度表达,减轻血管平滑肌细胞的过度增殖,这与其能够减轻移植静脉内膜增生重构的作用有关。……   
[关键词]:人参皂苷Rb1;移植静脉;增殖细胞核抗原;转化生长因子-β;内膜增生;再狭窄
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:郑州大学2012年