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竹荪多糖的提取分离、结构分析和生物活性研究

华洋林

  本文以竹荪(Dictyophora indusiata)子实体为原料,对其多糖提取工艺、分离纯化、结构鉴定等进行了深入的研究,并对其水溶性多糖抗氧化活性,酸性竹荪多糖和碱性竹荪多糖增强免疫力功效进行了较为系统的研究,研究结果表明: 以福建古田、建阳、顺昌、浙江江山、贵州贵阳和云南红河地区的6种竹荪子实体为原料,测定了其粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、粗多糖、灰分、矿质元素和氨基酸含量。6个供试地区的竹荪子实体均富含蛋白,多糖与粗纤维,且脂肪含量低,但多糖含量差异明显,来自福建建阳的样品粗多糖含量达到30.68%,来自贵州的样品多糖含量仅为18.68%;此外,竹荪子实体富含Ca、Mg、Fe和Zn等人体必需的矿质元素,其中来自浙江和贵州的样品中含量最为丰富;通过氨基酸分析,竹荪蛋白中的限制性氨基酸为赖氨酸,不同产地的竹荪样品存在较大差异。 应用响应面分析法优化了竹荪多糖水浸提工艺。研究了提取时间、提取温度、料液比、pH对多糖得率的影响。在此基础上以提取温度、料液比、pH值为考察因素,以多糖得率为指标,采用响应面实验方法,确定了竹荪多糖提取的最优工艺条件为提取温度95℃、pH=2.0、料液比1:33。在此条件下,其多糖得率达到11.717%,实际测得多糖得率为l1.698%。选取DPPH法和ABTS法评价对上述条件提取出的多糖的清除自由基的能力,DPPH法中,竹荪多糖的EC50为0.150mg/mL(Vc的EC50为0.011 mg/mL),ABTS法中,竹荪多糖的EC50为0.909 mg/mL(Vc的EC50为0.209 mg/mL),竹荪多糖具有较好的抗氧化活性。 从竹荪(Dictyophora indusiata)子实体提取水溶性多糖,经Sephadex G75和DEAE-Sepharose FF柱层析纯化得到长裙竹荪多糖Dip-1和Dip-2,采用GPC方法分别测定该多糖的分子量为2100990和19755;分别测定了其单糖组和糖苷键连接分别为:Dip-1的单糖组成为Fru 1.30%,Glc 85.34%, Man 13.36%,糖苷键组成为:非还原端Man /非还原端Glc /→1)-Glc-(6→/→1)-Man-(3,6→= 1:9.3:5.6:1;Dip-2的单糖组成为Xyl 20.6%, Fru 7.7%, Gal 17.7%, Glc 13.1%,Man 40.9%,糖苷键摩尔百分比:→1)-Xyl-(5→/→1)-Gal-(3→/→1)-Gal-(6→/→1)-Glc-(6→/非还原端Glc /→1)-Man-(2→= 18.7:2.4:13.7:1:10.8:37.2。并对水提多糖进行抗氧化动物实验和ORAC方法进行抗氧化实验研究,结果表明水提多糖具有很好的抗氧化作用。 竹荪(Dictyophora indusiata)子实体经水溶液提取后,滤渣采用碱提,1M HCl溶液提取,滤液真空浓缩后得到竹荪粗多糖Di-1;滤渣再用1% NaOH溶液提取,滤液真空浓缩后得到竹荪粗多糖Di-2;用Sevag法除去蛋白,乙醇分级沉淀,分别用30%、80%和95%乙醇沉淀,对80%乙醇沉淀的竹荪多糖Di-1和Di-2分别测定该多糖的单糖组成,糖苷键连接,Di-1的单糖组成为Rha 2.6%; Fru 13.6%; Gal 1.5% ; Glc 64.0% ; Man 18.3%,糖苷键摩尔百分比:→1)-Glc-(6→64.0/→2)-Man-(1→18.3 /→2)-Fru-(1→13.6 =4.7:1.3:1。Di-2的单糖组成为Rha 1.56%; Xyl 3.55% ; Fru 11.13%; Gal 1.45%; Glc 74.36 %; Man 7.95%,糖苷键摩尔百分比:糖苷键摩尔百分比:→1)-Glc-(6→69.8/非还原端Glc 4.6/→2)-Fru-(1→11.1 = 15.2:1:2.4。并对竹荪多糖Di-1和Di-2分别进行免疫动物实验,结果表明:Di-1和Di-2均有不同程度的增强免疫的作用。……   
[关键词]:竹荪多糖;提取;结构鉴定;抗氧化活性;免疫调节活性
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:华南理工大学2011年
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