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瘦素对鸡肝脏脱碘酶基因表达与活性的影响

李荣杰

  甲状腺素对禽类的生长发育起着十分重要的作用,而肝脏脱碘酶是调控循环甲状腺激素稳态的主要因子。本实验室以往的研究结果显示蛋内注射Leptin能够程序化地影响出雏后肉鸡的生长和发育,但是这种处理效应是否和血液中的甲状腺激素水平与肝脏中脱碘酶表达的改变有关,还不清楚。因此本研究旨在探讨:(1)蛋内注射Leptin对出雏后肉鸡早期血清甲状腺激素水平的影响;(2)蛋内注射Leptin对肝脏脱碘酶基因表达和活性的影响;(3)Leptin影响脱碘酶表达与活性的可能机制。 1蛋清内注射瘦素对肉鸡血清甲状腺激素水平和肝脏脱碘酶表达及活性的影响 挑选蛋重相近的三黄肉鸡种蛋,随机分为两组:对照组(Control, Con)在蛋清内注射100μL溶剂(Phosphate buffered saline, PBS), Leptin处理组注射5.0μg/100μLPBS (Lep)的重组小鼠Leptin,出雏后饲养至21日龄时采取肝脏和血清样品。用放免的方法测定血清总T3水平(Total T3, TT3),总T4水平(Total T4, TT4)和游离T3水平(Free T3, FT3)。实时荧光RT-PCR定量检测21日龄肝脏使T4脱碘转化为T3的脱碘酶1(D1)和使T3脱碘失活的脱碘酶3(D3)的基因表达,采用离子交换层析法检测D1和D3的活性。结果表明:Lep组肉鸡21日龄血清中FT3和TT3的含量均显著升高(P<0.05),并且主要表现在雄性(P<0.05),雌性上述各指标与对照组相比无显著差异。血清中T4水平与对照组相比无显著差异。D1的基因表达和活性均在Lep组雄性中显著上调,而雌性与对照组相比无显著差异。D3的基因表达在Lep组雄性中显著下调,而在雌性中显著上调,D3活性在Lep组雄性中显著下调,雌性与对照组相比无差异。以上结果说明:蛋内注射Leptin能够显著提高出雏后肉鸡血清T3和游离T3水平,与肝脏脱碘酶D1上调而D3下调有关,这种处理效应主要表现在雄性。 2瘦素影响体外培养原代鸡胚肝细胞中脱碘酶基因表达和活性的机制研究 很多研究表明leptin主要通过三条信号途径(JAK-STAT途径,MAPK途径和P13K途径)起作用,然而瘦素到底通过哪条途径影响鸡胚肝细胞中脱碘酶的表达,还未见报道。为探讨Leptin影响脱碘酶表达的可能机制,本试验采用分离原代鸡胚肝细胞,血清培养基预培养24 h,待细胞完全贴壁后,改用无血清添加胰岛素、转铁蛋白和硒元素(ITS)培养液,并研究不同浓度的Leptin(0,1,10,100ng/mL)处理肝细胞48 h对脱碘酶表达的影响。此外,分别采用Leptin三条信号通路的抑制剂(JAK2抑制剂:AG490、ERK抑制剂:PD98590、PI3K抑制剂:LY294002)分析Leptin影响肝细胞脱碘酶表达的可能信号通路。结果显示:Leptin处理能够显著上调D1的基因表达与活性,同时下调D3的基因表达与活性;Leptin对D1的基因表达与活性的诱导作用可以被PI3K抑制剂LY294002逆转;而三条信号通路抑制剂均不能逆转Leptin对D3的基因表达与活性的抑制作用。以上结果表明Leptin可能通过PI3K信号通路诱导D1的表达与活性,而Leptin抑制D3的表达与活性的机制还有待进一步研究。……   
[关键词]:蛋内注射;瘦素;肉鸡;肝脏;鸡胚肝细胞;脱碘酶
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京农业大学2010年