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Kisspeptin-10对鹌鹑产蛋启动的影响及机制研究

黄炎冰

  Kiss基因编码蛋白Kisspeptins,其特异性受体为G蛋白偶联受体54(GPR54)。现有报道Kisspeptins及其受体表达于前脑,并发现鼠和人类缺乏GPR54表现出无法进入青春期和促性腺激素分泌不足的症状,提示Kisspeptin信号途径在繁殖中起重要作用。在一些哺乳动物上的研究表明,Kisspeptins通过激活前脑内GnRH神经元上GPR54信号通路从而促进GnRH释放,促进垂体促性腺激素的分泌。本实验以雌禽为研究对象,采用免疫组织化学法和重复腹腔内注射Kisspeptin-10方式,旨在探讨:1、雌禽下丘脑是否存在Kisspeptin样免疫活性物质表达;2.Kisspeptin是否影响雌禽产蛋启动及可能机制。 1雌禽下丘脑Kisspeptin样免疫活性物质检测 本研究采用免疫组织化学方法检测Kisspeptin-10在产蛋高峰期鸡下丘脑和丘脑的表达分布情况,免疫印迹(Western Blot, WB)检测产蛋高峰期鸡及产蛋早期鹌鹑下丘脑Kisspeptin-10蛋白的表达。结果显示:在下丘脑室旁核(Paraventricular Nucleus, PVN)、丘脑前背外侧核(DLA, Nucleus Dorsolateralis Anterior)、浅表灰质纤维层(SGFS, Superficial Gray Matter Fiber Layer)、丘脑闰核(ICT, Nucleus Intercalatus Thalami)均检测到Kisspeptin免疫活性细胞。WB结果显示产蛋高峰期鸡和产蛋早期鹌鹑下丘脑均检测到目标分子量位置(15~17 KD)的蛋白条带,说明雌禽下丘脑存在Kisspeptin样免疫活性物质表达。 2 Kisspeptin-10对鹌鹑产蛋启动的影响及机制 鹌鹑出雏后24小时定为1日龄,生长至20日龄时将75羽鹌鹑随机分为三组(25只/5个重复/组),分别为:对照组(Con,0.3 mL生理盐水)、低剂量(L,10 nmol/只)和高剂量处理组(H,100 nmol/只),其间自由采食和饮水,连续注射22天。定期称量体重和记录产蛋情况。鹌鹑在44日龄时产第一枚蛋,其后每天记录产蛋情况,于8周龄时宰杀采样。收集血液制备血清,记录鹌鹑体重、生殖器官重,肝脏重及大卵泡数,采集下丘脑、松果腺、垂体、卵巢(小卵泡)及等级卵泡F1颗粒层置于液氮中速冻。放射性免疫分析方法(RIA)检测促性腺激素、雌二醇(E2)、瘦素(Leptin)含量,相对荧光定量RT-PCR检测生殖轴相关基因表达,WB检测下丘脑FTO及Leptin受体的蛋白表达。结果显示:(1)与对照组相比,高剂量处理组在观测第5、7、11天产蛋率明显升高(P<0.05),在观测第9、10天极显著升高(P<0.01);低剂量处理组于开产第9天时鹤鹑产蛋率显著升高(P<0.05)。双因素(处理与日龄)分析统计结果显示,不同组间鹌鹑产蛋率差异极显著(P<0.01);与Con组相比,L组和H组鹌鹑开产率分别显著和极显著提高(P<0.05和JP<0.01)。但日龄间无显著差异(P>0.05)。(2)Kisspeptin-10处理可显著增加开产早期鹌鹑的大卵泡数(P<0.05);且低剂量处理产道重量显著增加(P<0.05),高剂量处理有增加产道重量的趋势(P= 0.07). (3) Real-time PCR结果显示:与对照组相比,高剂量Kisspeptin-10处理组下丘脑GnRH-ⅠmRNA和POMC mRNA表达显著升高(P<0.05);高剂量组垂体LH mRNA表达显著升高(P<0.05)、但FSH mRNA表达显著下降(P<0.05);高剂量组垂体GnRH受体-Ⅱ(GnRHR-Ⅱ) mRNA极显著升高(P<0.01)、小卵泡FSH受体(FSHR) mRNA和LH受体(LHR) mRNA表达显著下降(P=0.012)。与对照组相比,高低剂量组F1卵泡颗粒层LHR和GnRH-ⅠmRNA表达均显著下降(P<0.05)、高剂量组FSHR mRNA极显著下降(P<0.01). Kisspeptin处理不影响下丘脑FTO及Leptin受体基因及蛋白的表达。结果提示:连续腹腔内注射Kisspeptin-10显著提高开产早期产蛋率,促进鹌鹑提早进入产蛋期,此作用可能是通过加快育成期生殖系统器官发育、促进生殖轴中枢GnRH-Ⅰ基因表达和/或直接作用于外周生殖系统而实现的。……   
[关键词]:Kisspeptin-10;产蛋;HPG轴;鹌鹑
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京农业大学2011年