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化妆品用抗敏抗刺激活性物质的筛选、提取及作机理研究

王海涛

  皮肤过敏与刺激是指机体受到某些抗原刺激时,出现以生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的异常的免疫性应答,主要分为变应性接触性皮炎和刺激性接触性皮炎两大类。针对其两者的发生机制,本文对25种具有抗敏抗刺激功效的植物提取物进行了筛选、对其主要功效成分的含量、提取及工艺优化、作用途径和作用机理进行了研究。 通过RBC溶血实验、透明质酸酶体外抑制实验和改良RBC溶血实验对25种植物提取液进行了刺激性、抗敏功效、抗刺激功效进行筛选。米邦塔仙人掌粉提取液的抗敏抗刺激效果最好,其1.0%水溶液的RBC溶血率、透明质酸酶体外抑制率、对SDS致损血红细胞的抑制率分别为3.1%、97.1 %、46.4 %。化学成分分析表明仙人掌提取液主要功效成分为仙人掌多糖类物质,约占可溶性固形物含量的73.9 %。 比较酶解辅助浸提和传统水提米邦塔仙人掌多糖的效果,结果表明纤维素酶酶解能使多糖溶出量增加15 %;蛋白酶能使总可溶性固形物的含量提高18.5 %;酶解会使提取液中离子强度明显增加,较热水浸提液增加23 %。单因素考察,液料比15~25,浸提温度40~60℃,浸提时间大于1.0 h时,仙人掌多糖得率较高。采用Box-Benhnken中心组合试验及响应面和实际操作分析,确定了仙人掌粗多糖提取优化参数:液料比20:1、浸取时间2 h;浸取温度50℃,此时提取液中多糖的平均含量为17.6 mg/mL。 采用离子交换树脂对米邦塔仙人掌粉提取液进行脱盐脱色处理。通过静态筛选,从12组不同类型树脂中选出001×7-D309离子交换树脂组效果最好,其脱盐率约为92.0%,脱色率约为78.6%。动态实验确定001×7-D309离子交换树脂脱盐脱色的最优流速为4 BV·h~(-1),在7倍树脂体积的上样量情况下,脱盐率可达到96.0%,,脱色率达到80.0%以上,001×7与D309树脂对仙人掌粉提取液中可溶性固形物均有约0.7%的吸附损失。在7次之内的循环再生使用中,001×7-D309离子交换树脂的脱盐率和脱色率分别稳定在95.0~96.0%和80.0%左右,且再生性能良好。实验首次发现T-G体系对溶液电导率具有降低作用,且呈现较好的线性关系。10 %的T物质能使溶液电导降低到63 %左右;而10%的T物质和23%的G复配能使溶液电导降低到32 %左右。7种化妆品稳定性测试均表明,10%的T物质和23%的G有助于提高提取液的稳定性。 实验所得的抗敏抗刺激复配液在2.0 %的使用量时,其透明质酸酶抑制率、O_2、?OH和DPPH自由基的清除能力能够分别达到87.3 %、76.0%、68.1%和77.8%,表明具有很好的抗敏和清除自由基功效。UV照射35 min之内,添加5.0%复配液的RBC悬液较正常UV照射的RBC发生溶血时间较慢。ELLSA法测定5%的复配液对血管内皮细胞生长因子受体Flt1的抑制率最大,达到35.4 %,表明抗敏抗刺激复配液具有一定的抑制UV辐射损伤细胞和抑制毛细血管扩张的功效。 通过RBC溶血刺激模型和彗星实验检测抗敏抗刺激复配液对SDS致细胞膜刺激损伤和小鼠肝细胞DNA损伤的抑制效果。结果表明复配液质量浓度在20~100μg/mL之间时,其自身对细胞膜和DNA无损伤,但对SDS致损RBC细胞膜和DNA具有抑制功能。当浓度在40~80μg/mL时,其对SDS致细胞膜损伤的抑制作用呈现较好的量效关系。荧光显微镜下,浓度大于60μg/mL时,复配液抑制DNA损伤能力明显。在100μg/mL的使用量时,细胞彗星状头尾较集中,其抑制SDS对DNA的损伤效果显著,可使DNA损伤细胞拖尾率和彗尾长度分别降低58 %和57.8 %。复配液对粪大肠杆菌群(Fecal coliforms)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)能够抑制其对数期初期的生长。在透射电镜下观察,经抗敏抗刺激液作用10 h后微生物的生长、繁殖和代谢均受到抑制,菌体结构造成破坏,菌体扭曲变形,进而细胞壁破裂内容物外漏,直至成为空壳或分解为颗粒状残渣,这与其对动物血红细胞的保护作用形成截然相反的作用效果。 人体功效评价表明抗敏抗刺激复配液具有明显的即时镇静皮肤不适症状的功效,有效率为86.9%;能够明显增强皮肤耐受性;5.0 %抗敏抗刺激复配液的膏霜在60 min内,皮肤红肿消退率达到52.7 %;辣椒素致痒再涂抹膏霜10 min后,瘙痒减少77.8%。临床功效验证结果表明,施用含5.0 %复配液的膏霜后,患者皮肤敏感性、瘙痒程度和红肿程度总体改善效果的评价为93.6 %、95.5 %和91.3 %的有效率,且97.8 %的受试者认为含5.0 %复配液膏霜的安全性及耐受性“非常好”或“好”。……   
[关键词]:化妆品;抗敏抗刺激;米邦塔仙人掌;红细胞溶血试验;彗星试验;细胞膜损伤;DNA损伤;血管内皮细胞生长因子受体1
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:北京工商大学2010年