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甘草细胞悬浮培养系的建立与悬浮细胞中活性成分分析

包金龙

  甘草是中草药之王,《本草纲目》将其列为百药之首。随着甘草用途的扩展,野生甘草资源面临枯竭的严峻形势。植物细胞培养技术是解决目前药用植物资源危机的理想途径之一。本论文主要围绕甘草细胞悬浮培养系的建立、甘草细胞生长与营养消耗的动力学分析以及甘草悬浮细胞中有效成分的分析进行研究,主要研究结果如下: 1、通过筛选外植体、选择和优化培养基及培养条件,建立了甘草细胞悬浮培养体系。结果表明甘草下胚轴最适合诱导胚性愈伤组织,采用MS+2, 4-D (1.0 mg L~(-1))+6-BA (1.0 mg L~(-1))+NAA (1.0 mg L~(-1))培养基诱导率最高,均达到90%以上。而在继代培养基MS+NAA (0.5 mg L~(-1))+2, 4-D (0.5 mg L~(-1))+6-BA (0.5 mg L~(-1))中愈伤组织生长速度快、状态最好。建立了稳定的甘草细胞悬浮培养体系,选择MS基本培养基,接种量为10%,培养基的初始pH值为5.8。 2、对甘草细胞悬浮培养过程中细胞生长、产物合成及基质消耗进行动态研究。发现在整个生长周期中培养液的pH值在4.5~6.0之间变化。甘草细胞的生长曲线呈“S”型,细胞的生长与碳、氮、磷元素的消耗及电导率的变化相吻合。甘草悬浮细胞培养的生长周期为21d,最大生物量出现在第18d。 3、建立了HPLC技术测定甘草有效成分的方法。结果表明悬浮培养的胀果甘草细胞中甘草酸含量为1.138mg g~(-1),野生甘草中的甘草酸和甘草细胞中的甘草酸的HPLC图谱相似度为86%。甘草细胞总黄酮含量最大可为6.7 mg g~(-1),达到了干重的0.67%。野生甘草植株中的总黄酮含量为3.53%,通过HPLC图谱进行了相似度评价,相似度为75.2%……   
[关键词]:甘草细胞;悬浮培养;甘草酸;甘草黄酮;指纹图谱
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:内蒙古科技大学2010年