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BacillussubtilisZJUTZY固定化转化生产γ-PGA及其水解定量检测方法的改进

郑重

   γ-PGA(γ-聚谷氨酸)是一种通过微生物合成的均聚氨基酸化合物,它由谷氨酸单体以γ-羧基与氨基相缩合而成,是一种水溶性和可生物降解的新型生物高分子材料,近年来由于其被作为增稠剂,保湿剂,药物载体等而一直被广泛应用于工业领域,是一种有极大开发价值和前景的多功能性生物制品。 Bacillus subtilis ZJUTZY为本实验室从纳豆中分离出的γ-聚谷氨酸(γ-PGA)高产菌株,本文对其固定化转化产γ-PGA的生产条件进行优选。实验得出海藻酸钙包埋具有较高的产量而且包埋菌量固定,因此确定海藻酸钙为固定化材料,采用包埋法进行固定。后采用单因素法对转化生产γ-PGA的菌种固定化条件进行优选,得到的较优条件如下:温度为37℃,pH为7,摇床转速为200rpm,接种量为12%,固液比为1:3,氯化钙浓度为4%。 通过增加一检测样品,即醇沉物水溶中的谷氨酸含量,并且通过不断地实验,确定了水解液中和所需的NaOH的添加量,我们改进了水解法测γ-PGA产量的检测方法,并在此基础上,研究了Bacillussubtilis ZJUTZY产γ-PGA的产量变化,得出30小时的γ-PGA的产量最高为11.02g/L。 而后根据pgsB在不同菌株中的序列,及与本实验室菌株同源性较高的Bacillus subtilis ZJU-7的pgsB序列,设计了2对引物。当分别用pgsB-F和pgsB-R为正反向引物,以Bacillus subtilis ZJUTZY基因组DNA为模板时,PCR获得了一段长1221bp的基因片段,对PCR片段进行序列测定pgsB基因,发现该基因片段与多种Bacillus subtilis菌株的pgsB基因具有较高的同源性,相似度达到了99%,故可初步认定PCR得到的DNA片段为pgsB基因的部分序列。……   
[关键词]:γ-聚谷氨酸;枯草芽孢杆菌;固定化;pgsB
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:浙江工业大学2010年
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