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牛初乳中免疫球蛋白A的分离纯化

章飞燕

  牛初乳中含有比常乳高10~100倍的IgG、sIgA和IgM。其中的sIgA与母乳中的sIgA具有免疫同源性,具有抗菌、抗炎和抗病毒等生物活性功能,因此开发利用牛初乳中的sIgA具有十分重要的现实意义。 离心脱脂后得到的牛初乳乳清经过40%的硫酸铵沉淀,获得的盐析产品主要含有三种免疫球蛋白,分别是IgG、sIgA和IgM。本文主要研究了从此盐析样品中分离纯化得到免疫球蛋白A的方法与工艺。包括阴离子交换柱层析分离获得免疫球蛋白A和免疫球蛋白M (sIgA+IgM)粗产品,凝胶柱层析进一步分离获得免疫球蛋白A这两个主要过程。 经脱脂、盐析后得到的牛初乳原料样品中主要含有IgG、sIgA和IgM,其中IgG的含量约为81~84%,sIgA+IgM的含量约为16~19%。首先,以阴离子交换柱层析对三种免疫球蛋白进行初步分离,除去大部分的免疫球蛋白G,获得sIgA+IgM的粗产品(含有少量IgG)。利用穿透曲线实验考察了DEAE-650M阴离子交换吸附剂对不同的免疫球蛋白分离纯化的能力,并讨论了缓冲液pH和离子强度对其分离纯化能力的影响。在40.2 mL的DEAE-650M阴离子交换层析柱中,当上样浓度为50 mg/mL,上样量为1.24mg/mLDEAE-650M阴离子交换介质,磷酸盐缓冲液离子强度为0.15 M,pH为7.3时,免疫球蛋白的分离效果最好,在此条件下通过层析实验可获得纯度为56.69%的sIgA+IgM粗产品,而且不同的免疫球蛋白在DEAE-650M阴离子交换介质中的动态吸附量随着缓冲液离子强度的增大而减小。通过层析实验,考察了强碱3#树脂对不同的免疫球蛋白分离纯化的能力,并讨论了不同缓冲液体系及缓冲液的pH和离子强度对其分离能力的影响。在32.8 mL的强碱3#树脂层析柱中,当上样量为1.52 mg/mL强碱3#树脂,上样浓度为50 mg/mL时,免疫球蛋白在磷酸盐缓冲液中的分离效果要优于tris-HCl缓冲液中的分离效果。优化后的工艺条件为离子强度0.03 M,pH7.0的磷酸盐缓冲液,在此条件下可获得纯度为91.24%,回收率为47.00%的sIgA+IgM粗产品。 将在最优条件下,从强碱3#树脂层析柱中分离获得的slgA+IgM粗产品溶液在去离子水中透析脱盐后,冷冻干燥,平均1 mL sIgA+IgM粗产品溶液可获得0.0010 g粉末样品。将冻干后的粉末样品用0.03 M,pH 7.0的磷酸盐缓冲液重新溶解,配制成浓度为10 mg/mL的上样溶液,在36.8 mL的HW-55F凝胶层析柱中,上样量为1.35mg/mLHW-55F凝胶,磷酸盐缓冲液离子强度为0.03 M,pH为7.0的条件下,可以使sIgA与IgM得到有效的分离,获得sIgA产品的纯度可能已达到96.88%左右。……   
[关键词]:牛初乳;免疫球蛋白;阴离子交换层析;凝胶过滤层析;强碱树脂
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:浙江大学2010年