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成都平原农田土壤芽孢杆菌的分离鉴定及三株Bt菌的生物特性和毒力研究

毛云莹

  从成都平原农田土壤采集60份土样,通过醋酸钠—抗生素培养基筛选得到98株芽孢杆菌,采用ERIC-PCR, ARDRA,代表菌株16S rDNA序列分析对供试菌株的遗传多样性和系统发育进行了研究。采用cry基因通用引物对供试菌株进行扩增,得到了三株cryI基因型苏云金芽孢杆菌,对其伴孢晶体染色检查。进而对三个Bt菌杀虫活性进行了测定,主要结果如下: (1)从成都平原农田土壤中分离得到芽孢杆菌98株,ERIC-PCR聚类结果表明:所有供试菌株在72%的相似水平处聚在一起,在84%的相似水平上分成6个遗传群,另有7株细菌单独成群。ARDRA聚类结果表明,所有供试菌株在60%的相似水平上聚在一起;在85%的相似水平上,全部菌株被分成了7个遗传群,遗传多样性明显。 (2) 16S rDNA序列分析构建的系统发育树中代表菌株分布在Bacillus, Paenibacillus属2个分支,其中S11与B. altitudinis 41KF2bT(AJ831842)的序列相似性达99.8%;S65和B. firmus IAM 12464T(XD 16268)的相似性为99.4%;S33,S60和S69与标菌B.aryabhattai B8W22T(EF114313)的序列相似性为100%;S8,S21,S96与B.thuringiensis IAM 12077T(D16281)的序列相似性分别为99.2%,99.0%,99.0%,出菌率为3%。 (3)形态特征观察表明,Bt菌为短杆状,伴孢晶体形状有圆形,方形,三角形,菱形和不定形等,多为圆形。用通用引物K5un2,K3un2对菌株S8,S21,S96进行cry基因扩增,在1500bp处均得到一条电泳带,说明它们含有cryⅠ型伴孢晶体。 (4)对三菌Bt株进行杀虫活性初筛显示,S21对供试鳞翅目(蚕)和鞘翅目(黄粉虫)昆虫具有较高活性。对其进行半致死浓度(LC50)值测定,得到在95%置信区间对蚕的LC50为0.81×108cfu/mL,对黄粉虫的LC50为0.89×108cfu/mL,半致死浓度均低于原液的1/3,且对蚕的杀虫活性高于黄粉虫。……   
[关键词]:苏云金芽孢杆菌;cry基因;杀虫活性;LC50
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:四川农业大学2011年