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鸡源乳酸菌的分离筛选及主要生物学特性研究

罗睿

  本研究采集了四川多个地区健康鸡的肠道和粪便,经筛选培养后,共分离出唾液乳杆菌(Lactobacillu salivarius)、发酵乳杆菌(Lactobacillus feumentum)、懒惰乳杆菌(Lactobacillus desidiosus)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、路氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)、肠乳杆菌(Lactobacillus intestinalis)和乳链球菌(Lactococcus sp)等42株细菌。 对分离菌株进行产酸性能、低酸度环境和高胆盐浓度培养及高蛋白酶耐受试验,筛选出能使培养液pH值从初始的6.0分别下降至稳定的3.78、3.55、3.62和3.76,且能在pH值为2.5的酸性环境、03%胆盐及1%胰蛋白酶中存活率达到80%以上的4株菌,并分别命名为LR-1、LR-5、LR-6和LR-15。 4株乳酸菌37℃培养48h发现,菌株LR-5和LR-6生长速度最快,在16h时即可达到1.79×1010和1.15×1010cfu/ml。用4株菌菌液(109cftu/ml)分别灌服18-20g左右的健康昆明鼠,每天1次,每次0.5ml,连续15天,无一只小鼠发病和死亡 4株乳酸菌对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌均具有明显的抑菌作用,其抑菌圈分别在17.51-22.68mm、12.74-21.29 mm和11.32-16.46mm之间。其中,菌株LR-5的对3种细菌的抑菌作用显著高于LR-1、LR-6和LR-15(p<0.01)。在混合培养抑菌试验中,4株乳酸菌与金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌混合培养24h后,3种肠道细菌活菌数分别从2.01×108 cfu/ml、4.92×108 cfu/ml和3.15×108 cfu/ml下降至0×100cfu/ml。其中,菌株LR-5的抑菌作用明显强于其它3株分离的乳酸菌(p<0.05),在混合培养18h后能完全抑制3种肠道菌的生长,而分离的另3株乳酸菌完全抑制肠道菌的时间为24h。 细胞黏附试验显示,LR-5对人克隆结肠腺癌细胞(Caco-2细胞)具有较强的黏附作用。正交试验结果表明,在pH值为6时,用耗尽培养上清(SCS)悬浮LR-5(109cfu/ml),37℃培养3h的黏附效果最优,平均黏附数达到59.23±1.40个菌/细胞,而LR-1、LR-6和LR-15仅为30.03±1.14、36.63+0.31和30.57±0.91个菌/细胞(p<0.01)。 通过对4株乳酸菌的产酸能力、耐酸性、耐胆盐特性、胰蛋白酶耐受性、生长特性、抑菌能力和对Caco-2细胞黏附性能的综合分析,最终筛选出1株(LR-5)优良的鸡源乳酸菌菌株。经常规细菌学鉴定和16Sr RNA扩增(NCBI基因注册号为JF745115),鉴定为路氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)。……   
[关键词]:乳酸菌;分离;筛选;抑菌;细胞黏附
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:四川农业大学2011年