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猪圆环病毒病小鼠动物模型的研究

邓治邦

  自1974年德国学者Tischer从多株连续传代的PK-15细胞中发现了猪圆环病毒1型(PCV1)以来,猪圆环病毒2型(PCV2)及其所断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)直到1991年才被报道。仔猪系统衰竭综合征目前已遍布世界各国,引起的经济十分严重,病毒所诱导的宿主免疫抑制,产生继发感染,对养猪业的直接与间接损失更是难以估量。 虽然PCV2是PMWS的主要病原,但触发PCV2感染并使其发展为PMWS尚需其他因素诱导,如病原体混合感染(细菌、猪繁殖与呼吸综合征病毒-PRRSV,猪细小病毒-PPV)、免疫刺激(佐剂和疫苗)等。诸多不确定性的因素给PCV2及其相关疾病的研究带来一定困难。因此,为进一步研究PCV2的致病机理,选择一种理想的实验动物,并建立一个好的实验动物模型,对PCV2的深入研究具有十分重要的意义。本研究选择昆明小鼠为实验动物,从PCV2的感染方法、感染宿主体内PCV2的分布以及病理组织的损伤、PCV2所致实验动物的繁殖障碍和PCV2与细菌联合感染的病理学等方面进行了研究,为建立有效的猪圆环病毒病动物模型奠定基础。 1猪圆环病毒2型实验性感染小鼠方法的研究 选用48只昆明小鼠,通过腹腔注射(n=24)、滴鼻接种(n=24)PCV2实验性感染小鼠。每一感染方式分别以四种不同的病毒量(10000 TCID50、1000TCID50,100TCID50、10TCID50)、每一病毒量感染小鼠6只。小鼠在感染后第28天处死,通过检测病毒复制与病理损伤评价小鼠的感染状态。结果显示:经腹腔和滴鼻接种均实现了PCV2对小鼠的感染,且病毒接种量在1000TICD50为宜。 2小鼠实验性感染PCV2的病毒分布与病理学研究 以1000TCID50PCV2腹腔注射昆明小鼠35只,分别在第3、7、14、21、28、35、42天剖杀。小鼠病理变化特征为:肺出血、肝局灶性坏死、脾淤血肿胀,淋巴结肿大出血,并在相应组织发现细胞凋亡与坏死,尤以淋巴器官细胞凋亡最为明显。免疫组化结果显示:PCV2在感染小鼠体内呈广泛性分布,病毒阳性信号在免疫器官的淋巴细胞、巨噬细胞、肺泡上皮细胞、肾小管上皮细胞、脑神经细胞和肝细胞等被检测到。 3小鼠感染猪圆环病毒2型的超微结构病变观察 10只小鼠由腹腔注射PCV2细胞培养物0.1 mL/只(含病毒1000TCID50),于感染14 d处死,电镜所观察的超微结构变化为淋巴器官、心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脑、肠等脏器实质细胞发生凋亡或坏死;细胞内线粒体水肿、内质网扩张;间质毛细血管淤血、炎症细胞浸润;并在脾脏、胸腺、淋巴结的淋巴细胞、巨噬细胞,以及肝细胞、肾足细胞、脑神经细胞的胞浆内发现病毒包涵体。PCR检测发现在感染鼠组织中可检测出PCV2 DNA。以上结果表明PCV2可在昆明小鼠多脏器实质细胞内复制,并诱导细胞凋亡。4猪圆环病毒2型感染小鼠致繁殖障碍的研究 16只成年昆明小鼠分别在怀孕前(n=7)、怀孕早期(n=4)、怀孕晚期(n=5)腹腔内接种PCV2。结果:16只雌鼠有1只死亡、1只发生难产、1只发生死产。13只正常生产母鼠共产仔123只,其中生长不良者24只(19.5%),哺乳期内死亡4只(3.2%)。病理学观察发现在母鼠、仔鼠脏器中均有典型的病理损伤,并可检出病毒。5猪圆环病毒2型与细菌联合感染小鼠的病理学研究 通过对小鼠PCV2与副猪嗜血杆菌或C型兽疫链球菌混合感染,从比较病理学角度分析PCV2与细菌致病的协同作用,结果表明:混合感染较单一感染的病情严重、其发病率、死亡率增高;病理组织学观察进一步发现混合感染鼠中,其脏器的病理变化加剧,实质细胞坏死和炎性渗出更为严重,由此说明PCV2与细菌混合感染具有明显的协同致病作用。 结论:PCV2能够在昆明小鼠体内复制,所引起小鼠的组织损伤与PMWS病变一致;PCV2与细菌混合感染具有明显的致病协同作用。因此,昆明小鼠可以作为猪圆环病毒的动物模型。……   
[关键词]:猪圆环病毒2型;病毒复制;组织损伤;昆明小鼠模型
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:湖南农业大学2011年