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异体细胞疫苗治疗非小细胞肺癌的血清蛋白质组学初探

黄海

  目的:评估异体肿瘤细胞联合粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)分泌细胞疫苗(GMV)治疗Ⅲ、Ⅳ期非小细胞肺癌(NSCLC)的安全性、免疫反应状况、治疗效果、实用性以及治疗前后血清多肽组学和蛋白质组学的变化。 方法:选择2006.11-2008.5天津市肿瘤医院患者病理证实,己完成或拒绝传统治疗的Ⅲ、Ⅳ期NSCLC患者64例,在患者及家属知情同意的情况下进行GMV疫苗治疗。每次皮下注射异体NSCLC肿瘤细胞系3种>1×101和GM-CSF分泌细胞(分泌量大于1ug/106细胞/24小时)混合物1ml,1次/周,共6次。在第1,5次注射同时,进行异体肿瘤细胞DTH反应检查。在第一次治疗前和最后一次治疗后取外周血样10ml。应用流式细胞仪检测CD4+Th细胞、CD8+CTL细胞、Treg细胞、NK细胞治疗前后比例变化情况。应用ELISA检测血清细胞因子IFN-γ,IL-4,TGF-β1变化情况。应用功能磁珠、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和生物信息学方法检测治疗前后血清多肽组学的变化。应用纳升级高效液相色谱电喷雾串联质谱(LC-ESI-MS/MS)和生物信息学方法探索治疗前后在蛋白质组学层面的特征。 结果:第一部分:疫苗治疗是安全的,所有患者均完成治疗。主要毒性是注射部位的反应。未发现疫苗相关的自身免疫反应。治疗前后IFN-γ,IL-4,TGF-β1的变化没有统计学差异。Treg细胞在治疗后的患者比治疗前降低(P=0.028)无完全缓解(CR)和部分缓解病例(PR)。中位随访时间18.6月,中位生存期13.2月。全部治疗患者1年、2年、3年生存率分别为45.4%、21.8%、7.8%。DTH反应(+)患者比DTH(-)患者无进展生存期和总生存期均延长,差异有统计学意义(P=0.031,0.041)。DTH反应(+)患者和DTH(-)患者中位生存期分别为14.2月(3.5-42.0月)和10.8月(3.0-36.0月)。 第二部分:血清多肽组检测:非小细胞肺癌疫苗治疗前后共检测到151个蛋白质峰,自身配对分析发现有7个血清蛋白质表达水平在肺癌患者治疗前后的血清中有统计学差异,鉴定结果大部分是补体C3和急性时相反应蛋白片段。 第三部分:血清蛋白质组检测:血清蛋白质组检测发现差异蛋白17个,其中上调蛋白14个,下调蛋白3个。表达上调的差异蛋白根据功能可分为:(1)GMV急性时相反应蛋白;(2)免疫球蛋白;(3)补体蛋白;(4)细胞损伤相关蛋白。表达下调的差异蛋白根据功能可分为:(1)运输蛋白;(2)代谢蛋白;(3)锚定蛋白。 结论:GMV疫苗治疗NSCLC患者是安全可行的,可能改善了NSCLC患者的预后。DTH阳性反应的患者有更长的生存期。血清多肽组和蛋白质组检测发现差异蛋白提示GMV治疗前后NSCLC患者可能同时存在炎症反应、免疫反应、细胞损伤。这些差异蛋白可为研究或发现抗肿瘤药物作用的新靶标提供线索。……   
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