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黑木相思不同优良无性系组培快繁技术比较研究

王盼盼

  黑木相思(Acacia melanoxylon )属含羞草科(Mimosaceae)金合欢属(Acacia Mill.),是相思类最高大乔木之一。本试验以黑木相思10个不同优良无性系为研究对象,分别从直接器官发生再生植株和间接器官发生再生植株两个方面探索不同无性系组培过程中每个技术环节,为完善黑木相思组织培养快繁技术、促进组培产业化及在园林绿化方面的大面积推广提供科学依据和技术支撑。主要研究结果如下: 1.黑木相思无菌体系的建立。采用随机区组设计,分析三种消毒方法对不同无性系半木质化茎段污染率的影响,结果表明,无性系FM1、FM2、FM5、FM6、FM9、FM18、FM19、FM21的外植体在75%酒精(30s)+2%次氯酸钠(10min)+0.1%升汞(8min)上处理污染率最低,无性系FM3、FM12的外植体在75%酒精(30s)+0.1%升汞(8min)上处理污染率最低。 2.黑木相思不同无性系腋芽诱导。采用正交试验设计,分析不同培养基对黑木相思不同无性系腋芽诱导的影响,结果表明,不同培养基对同一无性系腋芽诱导有显著差异,同一培养基对不同无性系腋芽诱导亦存在显著差异。整体分析影响各无性系腋芽诱导率的因素,以培养基类型的影响最大,其次6-BA,NAA影响最小。各无性系诱导率差别较大,整体由高到底顺序为:FM12>FM6>FM2>FM19>FM3>FM9>FM21>FM1>FM5>FM18。筛选各无性系不定芽诱导的最佳培养基,其中无性系FM1、FM6、FM19的培养基为改良MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.3mg/L ,无性系FM2、FM5、FM12的培养基是MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.3mg/L ,无性系FM9、FM18、FM21的培养基是MS+6-BA2.5mg/L+NAA0.4mg/L,无性系FM3的培养基是MS+6-BA2.0mg/L+ NAA0.4mg/L。 3.黑木相思不同无性系组培苗增殖。采用正交试验设计,分析不同激素配比对组培苗增殖系数的影响,结果表明,不同培养基对同一无性系组培苗增殖系数有显著差异,同一培养基对不同无性系组培苗增殖亦存在显著差异。整体分析影响各无性系增殖系数的因素,以6-BA对增殖系数影响最大,其次是NAA,GA对各无性系增殖影响最小。不同无性系间整体平均增殖系数由高到低顺序为:FM6>FM1>FM19>FM5>FM9>FM21>FM2>FM3>FM12>FM18。筛选各无性系不定芽的最佳增殖培养基,其中无性系FM1、FM3的培养基是MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.2mg/L+GA0.3mg/L ,无性系FM2、FM6的培养基是MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.2mg/L+GA0.1mg/L ,无性系FM5、FM21的培养基是MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.1mg/L+GA0.3mg/L ,无性系FM12、FM19的培养基是MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+GA0.2mg/L ,无性系FM9的继代最佳培养基是MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.05mg/L+GA0.2mg/L ,无性系FM18继代最佳培养基是:MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.1mg/L+GA0.1mg/L。 4.继代次数对黑木相思不同无性系组培苗的增殖影响。采用随机区组设计,随着继代次数的增加,各无性系组培苗整体呈现出相对一致的规律,即其增殖系数均先增大后减小。其中无性系FM1、FM3、FM6、FM9、FM21组培苗在第4次继代时增殖系数最大,无性系FM2、FM5、FM19在第5次继代时增殖系数最大,无性系FM12、FM18在第3次继代时增殖系数最大。 5.黑木相思不同无性系组培苗生根。采用正交试验设计,分析不同生长素配比对组培苗生根率的影响。结果表明,不同培养基对同一无性系组培苗生根率有显著差异,同一培养基对不同无性系组培苗生根率亦存在显著差异。整体分析影响各无性系生根率的因素,以生长素IBA、ABT的效果最显著,NAA影响效果较小。不同无性系间整体平均生根率由高到低顺序为:FM2>FM5>FM6>FM3>FM1>FM21>FM18>FM19>FM12>FM9。筛选各无性系组培苗的最佳生根培养基,无性系FM1、FM21的培养基是1/2MS+IBA0.5mg/L+ABT1.0mg/L+NAA0.4mg/L ,无性系FM2、FM3的培养基是1/2MS+IBA0.5mg/L+ABT1.5mg/L+NAA0.4mg/L ,无性系FM9、FM12的培养基是1/2MS+IBA0.5mg/L+ABT0.5mg/L+NAA0.4mg/L ,无性系FM5的生根培养基是1/2MS+IBA0.7mg/L+ABT1.5mg/L+NAA0.4mg/L ,无性系FM6生根培养基是1/2MS+IBA0.7mg/L+ABT1.5mg/L+NAA0.2mg/L,无性系FM19生根的最佳培养基是:1/2MS+IBA0.5mg/L+ABT1.5mg/L。 6.两步生根法对无性系FM1、FM6生根率的影响。无性系FM1、FM6生根率在生长素IBA浓度为2mg/L,暗培养5d时达最高,分别达100%、97.5%,生根效果最好,根粗、长。 7.黑木相思不同无性系移栽成活。基质黄心土:泥炭土=2:1时的成活率高于黄心土:蛭石=2:1时的成活率,且幼苗的生长状况也较后者好。不同无性系的成活率各不相同,无性系FM5成活率最高为99%,而FM18成活率最低,仅有57%。10个无性系的成活率大小为:FM5> FM21>FM1>FM3>FM6>FM2>FM19>FM9>FM12>FM18。 8.黑木相思不同外植体消毒。嫩茎段的最佳消毒处理是:75%乙醇处理20s+0.1%升汞处理7min,茎尖的最佳消毒处理是:75%乙醇处理10s+0.1%升汞处理3min,幼叶的最佳消毒处理是:75%乙醇处理10s+0.1%升汞处理4min。 9.黑木相思不同无性系愈伤组织诱导。采用正交试验设计,分析不同激素配比对不同无性系的三种外植体的诱导率。结果表明,不同培养基对同一无性系的不同外植体愈伤诱导各有差异,同一培养基对同一无性系的不同外植体愈伤诱导也存在差异,同一培养基对不同无性系愈伤诱导亦存在显著差异。三种材料中以茎尖愈伤组织诱导效果最好,其次幼叶,嫩茎段诱导率最低。整体分析影响因素大小,以2,4-D对愈伤诱导影响作用最大,其次是6-BA,NAA影响作用最小。不同无性系的诱导情况差异较大,无性系FM1、FM2、FM3、FM6、FM9、FM12、FM18、FM19均能诱导愈伤组织,无性系FM5、FM21没能成功诱导出愈伤组织。 10.黑木相思不同无性系愈伤组织继代。设计5种培养基,结果表明,2,4-D和6-BA的激素组合适合黑木相思愈伤组织继代。无性系FM1、FM2、FM3、FM9、FM19愈伤组织继代最适培养基为MS+2,4-D0.5mg/L+6-BA2.0 mg/L,无性系FM6、FM12在培养基MS+2,4-D0.2mg/L+6-BA1.0 mg/L中长势最好,无性系FM18愈伤组织在所有处理中都不生长,最终褐化严重死亡。 11.抗褐化剂对愈伤组织褐化的影响。以无性系FM6愈伤组织为材料,结果表明抑制愈伤组织褐化效果最好的是维生素C,浓度是100mg/L时,褐化率最小为29.3%。 12.黑木相思不同无性系愈伤组织分化。采用正交试验设计,分析不同激素配比对不同无性系愈伤组织分化的影响,结果表明,不同培养基对同一无性系愈伤组织分化有显著差异,同一培养基对不同无性系愈伤组织分化亦存在差异。整体分析影响愈伤分化率的因素,发现6-BA的影响效果大于NAA的影响效果,其中以二者均为低浓度时愈伤分化率较高。不同无性系间整体愈伤组织分化率大小为:FM1>FM19>FM9>FM2>FM12。无性系FM1、FM9、FM12、FM19愈伤组织分化的最佳培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L,无性系FM2愈伤组织分化的最佳培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2 mg/L。无性系FM3、FM6愈伤组织未能分化。……   
[关键词]:黑木相思;无性系;离体培养;直接器官发生;间接器官发生
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:福建农林大学2011年