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肝硬变组织中变异肝细胞结节的检出及其遗传学改变

滕晓英

  目的: 肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是人类最常见的恶性肿瘤之一,其发生机制尚未完全阐明。对肝移植时取出的病肝进行的观察显示,变异肝细胞病灶(focus of altered hepatocytes, FAH)是最早期、最常见的一类肿瘤前期病变,它们可能通过形成变异肝细胞结节(nodule of altered hepatocytes, NAH)和/或小细胞性改变(small-cell change, SCC)进展为HCC。本研究观察了50例HCC切除标本,从癌周肝组织中检出了NAH和SCC改变,并对经显微切割分离的50个NAH病变进行了多个位点的杂合性丢失(loss of heterozygosity, LOH)的分析,以期能证实它们与HCC的关系及其相关的遗传学改变。 方法: 选择50例HCC和1例不典型腺瘤样增生(atypical adenomatoid hyperplasia,AAH)切除标本,对肿瘤周围肝组织进行组织学和免疫组织化学观察,按已经建立的标准检出不同类型的FAH和NAH,并对是否伴有SCC及其级别进行评判。应用61个微卫星位点分析检测22例HCC组织的LOH。选出代表性位点28个,对通过显微切割分离的50个NAH和5个普通再生结节(regenerative nodule, RN)进行LOH分析。同一个位点LOH发生率达到20%者被认为是频繁发生(频发)事件,达到30%者被认为是高度频繁(高频)发生,同一类病变发生LOH的平均数被称为等位基因失衡指数(allelic imbalance index, All)。并挑选可能与LOH发生相关的5种蛋白标志物进行免疫组织化学检测,以初步了解其功能改变。 结果: 共观察了50例HCC切除标本,癌周肝组织均呈慢性肝炎表现,其中38例(76%)伴有肝硬变。这些标本中,均检出FAH和NAH。在33例(66%)标本中查见SCC,均为低级别SCC。硬变癌周组织中SCC病变检出率为81.6%(31/38),高于不伴有肝硬变者(2/12,16.7%;P<0.05)。 对1例AAH的观察显示,此病变由多个NAH构成,多数伴有高级别的SCC改变。 挑选7例Edmondson I级、11例Ⅱ级和4例Ⅲ级HCC标本进行LOH分析。结果显示,Ⅰ级HCC标本的LOH检出率为86%(6/7),Ⅱ级HCC标本的LOH检出率为82%(9/11),而Ⅲ级标本均显示出等位基因失衡。三组标本的AII分别为6.3(0-10个)、3.3(0-12个)和8.5(3-16个)。 检测的61个位点中,43个(70%)在至少1例标本中发生了LOH。其中D16S3029位点的LOH频率最高,为43%(6/14),其它高频缺失的位点包括D11S2008(42%,8/19)、D17S796(40%,8/20)、D11S1301 (37%,7/19)、D8S261(36%,4/11)、D6S1008(31%,4/13)和D17S1840(30%,6/20),分别位于6q、8p、11p、16q及17p。 根据上述对HCC的观察,选择28个代表性位点,对NAH(n=50)以及RN(n=5)进行了LOH分析。17个不伴有SCC的NAH标本中,14个(82%)至少在一个位点上显示出等位基因失衡,AII为2.3(0-6个);33个伴有SCC的NAH中,28个(85%)显示出等位基因失衡,AII为3.2(0-8个);22例HCC标本中,28个位点的检测结果显示,19例(86%)显示出LOH,AII为5.4(0-12个),高于NAH以及伴有SCC的NAH(P<0.05);检测的5例RN均未显示出LOH。这些数据进一步证实,与RN不同,大多数NAH病变已经属于克隆性增生,不管是否伴有SCC。 我们的结果还显示,不伴有SCC的NAH和伴有SCC的NAH改变携带有特征性的遗传学改变,前者中,LOH频发位点包括D8S1754(4/16,25%)、D11S1301(6/13,46.2%)和D17S796(4/17,23.5%),而后一组病变的LOH频发位点包括D6S1008(7/32,21.9%)、D11S1301(9/29,31%)、D11S2008(7/33,21.2%)和D17S695(6/29,20.7%)。与HCC病变的LOH发生谱相对照,显示D11S1301、D17S796等位点的LOH从SCC发生之前就存在,提示可能与HCC发生的早期事件相关;D17S695等位点见于伴有SCC的NAH病变和HCC,提示可能与SCC的发生有关;D17S1840、D17S926等仅见于HCC,提示可能与肝细胞肿瘤恶性转化阶段有关系。 按照以上LOH结果,我们选出可能与LOH相关的5种蛋白进行免疫组织化学检测。50例HCC病例中,随着病理学分级的升高,p53蛋白表达水平有增加的趋势;XAF1的表达在FAH/NAH与伴有SCC的FAH/NAH和肝细胞癌间的差异不具有统计学意义;wwox清晰地勾勒出癌旁组织中的FAH/NAH, WWOX在FAH/NAH和HCC中的表达较正常肝组织显著降低,提示我们WWOX可能参与HCC形成的早期过程;而β-catenin和E-cadherin在三组间的表达无统计学差异。 结论: 通过对手术切除标本的观察,证实了NAH是广泛存在的,肝硬变组织中SCC的检出率明显高于不伴肝硬变的组织。 不管是否伴有SCC,多数NAH均可检测到LOH,表明它们都是克隆性增生,属于微小肝细胞腺瘤,相当于肝实质上皮内肿瘤(hepatic intraepithelial neoplasia,HIN)。 NAH及伴有SCC的NAH中发生的LOH改变都见于HCC标本,证实这两种病变都是HCC前期改变,代表了HCC发生的不同阶段。它们之间在LOH发生谱上的不同提示NAH的发生、进展(SCC发生)以及充分恶性表型的出现可能涉及不同的遗传学改变。 WWOX在伴/不伴有SCC的NAH和HCC中的表达较结构正常肝组织明显降低,提示其可能参与HCC形成的早期过程,可能与16q的LOH相关。……   
[关键词]:变异肝细胞病灶/结节;癌前病变;肝细胞肝癌;杂合性丢失;WWOX
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:北京协和医学院2009年