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益气养阴解毒方对小鼠Lewis肺癌细胞增殖及凋亡影响的研究

靳福鹏

  目的: 1、观察益气养阴解毒方含药血清对Lewis肺癌细胞增殖及凋亡的影响;2、观察益气养阴解毒方对Lewis肺癌移植瘤生长及对移植瘤细胞凋亡的影响;3检测益气养阴解毒方对凋亡相关蛋白Caspae-3表达的影响,初步探讨益气养阴解毒方抗肿瘤作用机制。 方法:1、采用血清药理学方法,用SD大鼠制备益气养阴解毒方低、中、高剂量、顺铂(DDP)、益气养阴解毒方联合DDP、生理盐水(NS)对照含药血清,体外培养Lewis肺癌细胞(LLC),采用MTT法检测各组血清对LLC增殖的影响;2、制作C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,将接种LLC的C57BL/6小鼠随机分为6组:NS对照组,益气养阴解毒方低剂量组、中剂量组、高剂量组,顺铂(DDP)组,益气养阴解毒方联合DDP组,每组10只,接种第七天开始给药,中药及NS连续灌胃20d,DDP隔日腹腔注射,观察移植瘤生长情况,接种后第28d处死动物,称各组瘤重,计算抑瘤率;3、流式细胞仪(FCM) Annexin V- FITC/PI标记法检测各组体外培养细胞凋亡率,免疫组织化学法(SP法)检测体外培养细胞Caspase-3表达;4、TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡指数,免疫组织化学法检测移植瘤细胞Caspase-3表达。 结果:1、益气养阴解毒方含药血清能够抑制体外培养LLC生长,且呈浓度和时间依赖性,高浓度作用72h抑制率达50%,中药联合DDP抑制率最高达94.67%;与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);2、益气养阴解毒方低、中、高剂量组对LLC移植瘤均有较明显抑制作用,抑瘤率分别为19.30%、32.83%、34.59%,瘤重低于对照组,有显著性差异(P<0.01),中药联合DDP组抑瘤率达83.71%,与其他各组比较,有显著性差异(P<0.01);3、各组含药血清均具有促进LLC凋亡的作用,并呈剂量和时间依赖关系,中药联合DDP作用最强,作用72h,细胞凋亡率下降,而坏死率升高,益气养阴解毒方各剂量组含药血清使Caspase-3的表达升高,呈剂量和时间依赖性,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),与其他各组比较,中药联合DDP作用最强(P<0.05);4、TUNEL法检测各中药组及联合组移植瘤细胞凋亡指数较对照组明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),各中药组促进移植瘤细胞Caspase-3表达,随剂量增加,表达增强,与对照组比较有差异性(P<0.05),中药联合DDP组表达最强,与其他各组比较有显著性差异(P<0.01)。 结论:1、益气养阴解毒方在体内外试验中均可抑制Lewis肺癌生长,与DDP联合作用增强;2、益气养阴解毒方在体内外试验中均表现出对Lewis细胞的凋亡促进作用,与DDP联合作用增强;3、益气养阴解毒方促进Lewis细胞凋亡可能与其促进Caspase-3的表达有关。……   
[关键词]:益气养阴解毒方;血清药理学;Lewis肺癌;细胞凋亡;Caspase-3
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:安徽医科大学2011年