手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

补肾活血法对高糖/缺氧状态下视网膜神经节细胞保护作用及其机理研究

马殿伟

  目的:观察补肾活血法对体外共同培养的视网膜神经节细胞和Muller细胞在高糖或(和)缺氧状态下的保护作用,并对其作用机制进行探讨。 方法:1.以中药血清药理学方法获得补肾活血(BSHX)复方中药含药血清。2.采用“改进的酶消化法”纯化培养新生SD大鼠视网膜Muller细胞及“两步筛选法”纯化培养新生SD大鼠视网膜神经节细胞,然后’将纯化培养的视网膜神经节细胞接种于以视网膜Muller细胞包被的培养板中,使这两种细胞按照一定比例(1:25)共同培养,建立视网膜神经节细胞与视网膜Muller细胞共同培养模型。3.在体外共同培养细胞的培养液中加入葡萄糖(终浓度为50mmol/L)/连二亚硫酸钠(终浓度为1.0mmol/L)造成细胞高糖/缺氧模型(高糖/缺氧组),仅加入终浓度为50mmol/L的葡萄糖造成细胞高糖模型(高糖组),仅加入终浓度为1.0mmol/L的连二亚硫酸钠造成细胞缺氧模型(缺氧组);在此基础上加入20%体积分数的中药含药血清进行中药血清干预。4.在实验干预24h、48h及72h三个时间段分别以酶联免疫吸附法(ELISA)测定体外共同培养细胞外液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出量和谷氨酰胺合成酶(GS)活性;根据[3H]标记的D,L-Glu摄入量判断共同培养细胞的谷氨酸(Glu)的摄取功能;氨基酸分析仪检测共同培养细胞外液中Glu释放量。SPSS13.0对所得数据进行统计学分析。 结果:1.成功建立视网膜神经节细胞与视网膜Miiller细胞共同培养模型:2.高糖组、缺氧组及高糖/缺氧组共同培养的细胞LDH漏出量比正常对照组均明显增加(P<0.05),表明细胞膜稳定性下降,BSHX中药血清能明显减轻该种病理损害。3.在48h时段.缺氧组及高糖/缺氧组共同培养细胞的Glu释放量均比正常对照组明显增加(P<0.05) .而高糖组G]u释放量比正常对照组明显减少(P<0.05BSHX中药血清能明显降低正常条件下(24h、48h、72h)、缺氧及高糖和缺氧条件下(48h、72h)共同培养细胞的释放量(P<0.05)。4.缺氧组及高糖缺氧组共同培养细胞的Glu摄入量在24h、48h、72h时段均比正常对照组明显降低(P<0.05);高糖组共同培养细胞的Glu摄取功能在24h和48h时段均比正常对照组增强(P<0.05),但72h时段Glu摄入比正常对照组降低(P<0.05);BSHX中药血清能明显提高正常及缺氧条件下24h、48h时段、高糖条件下48h时段以及高糖/缺氧条件下72h时段共同培养细胞的Glu摄入量(P<0.05)。5.缺氧组视网膜Muller细胞GS活性在48h时段比正常对照组明显降低(P<0.05);高糖组视网膜Muiller细胞GS活性在24h、48h和72h三个时段均比正常对照组增高(P<0.05),BSHX中药血清能够增加缺氧条件下及高糖缺氧条件下视网膜Muller细胞GS活性,并且该作用随着时间的延长其作用逐渐加强。 结论:1.在视网膜神经节细胞与视网膜Muller细胞体外共同培养模式下,视网膜Muller细胞对视网膜神经节细胞具有良好的营养和支持作用:2.高糖或(和)缺氧均可.造成体外共同培养的视网膜神经节细胞和视网膜Muller细胞的细胞膜稳定性下降、通透性增加;补肾活血中药血清能提高本实验不同条件下共同培养细胞的细胞膜稳定性,有利于维持细胞的正常生理状态和生理功能,有助于减少Glu的释放、降低细胞外Glu的堆积。3.高糖或(和)缺氧能够引起体外共同培养的视网膜神经节细胞和视网膜Muller细胞的Glu代谢障碍,主要表现为GS的活性降低,Glu的释放增加,而Glu的摄取减少;补肾活血中药血清能减少细胞释放Glu、增强视网膜Muller细胞GS活性,增加细胞对Glu的摄入及转化,减少细胞外Glu的堆积,从而减轻谷氨酸的神经兴奋性毒性,这可能是补肾活血法对高糖/缺氧状态下视网膜神经节细胞的保护作用机制之一。……   
[关键词]:糖尿病视网膜病变;补肾活血法;视网膜Mǖller细胞;视网膜神经节细胞;高糖;缺氧;谷氨酸;谷氨酰胺合成酶;乳酸脱氢酶
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:成都中医药大学2011年