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左金丸及其类方的性效差异及物质基础研究

程丹红

  近年来,在人类回归自然的趋势下,中药越来越受到人们的青睐。随着科技的进步和学科的发展,在实现中药现代化的进程中,对中药新药研发的投入也不断增加。与以往相比,中药的研发和创新能力也有了很大的提高。但在迅速发展的同时,低水平重复问题亦不容忽视,处方雷同是导致该现象发生的一个重要原因。中医药作为中华民族的传统文化瑰宝,经过数千年的沉淀,历代医家创立了千百万个用于治疗不同病症的中药复方,体现了中医药的博大精深。而经典名方则是我国方剂宝库中的精粹,已经有几千年的临床使用历史。大多数经典方剂及其类方组成非常相似,但功效迥异。科学认识和评价中医经典类方的相似性和差异性,验证类方之间客观差异的真实性,对于把握中医经典类方“形似而神不同”的本质提供科学依据,为类方客观差异的快速检测方法的建立提供技术参考,对于有效遏制中药新药研发中低水平重复的发生具有重要的现实意义。 因此,本课题选取组方简单、寒热属性明显、临床常用的左金丸、甘露散、茱萸丸、反左金丸四个复方作为代表方剂,在生物热动力学理论的指导下,从生物物理和生物化学角度研究左金丸及其类方的生物热活性,同时结合药理活性实验与化学分析研究。系统地考察左金丸及其类方的差异性和相似性,并对其物质基础进行初步的探讨。主要研究结果如下: 1.生物热动力学研究 采用微量量热法,分别以痢疾杆菌、枯草杆菌、正常小鼠肠道菌群、胃寒/胃热证小鼠肠道菌群作为生物模型,考察了左金丸及其类方对不同生物模型生长代谢的影响,定性且定量地对类方之间的生物热活性进行了评价。通过对类方作用下的不同生物模型热活性图谱以及特征参数如生长速率常数K、达峰时间T、产热功率P、最大发热量Q等的比较,结果表明,左金丸及其类方对细菌生长代谢热谱曲线以及热力学参数的影响差异较大。具体表现为:在左金丸与甘露散作用下的细菌生长速率常数K以及代谢热Q等减小,而茱萸丸与反左金丸则反之。并且代谢热输出Q呈现有规律地变化,即偏热性的反左金丸与茱萸丸能使代谢热增加较显著;反之,偏寒性方药左金丸与甘露散则降低热输出,与传统中医对该方药的赋性基本吻合,与以往对中药寒热药性的现代药理研究结果一致。因此,代谢热输出Q可以作为表征中药寒热药性的参考指标。综上,左金丸及其类方的生物热活性/寒热属性差异是客观存在的。 2.药理活性研究采用无水乙醇灌胃建立小鼠胃溃疡模型,考察左金丸及其类方对胃溃疡的治疗作用。通过测定血清胃泌素(GAS)水平以及胃粘膜病理学分析,结果表明:与模型组相比,左金丸、反左金、甘露散、茱萸丸各给药组对溃疡病变部位均有不同程度的改善,可以减轻病理损伤,对胃粘膜损伤有一定的保护作用,其中以左金丸的治疗效果最佳。同时各给药组小鼠血清GAS含量均不同程度地升高,其中左金丸给药组小鼠血清中GAS水平趋于正常水平。表明左金丸及其类方对胃溃疡的治疗作用不同,体现出对胃肠激素作用水平的不同,提示促进GAS的释放可能是左金丸及其类方保护胃黏膜的作用机制之一 3.物质基础研究 (1)采用超高效液相色谱(UPLC)法建立了左金丸、甘露散、茱萸丸、反左金丸水提物的化学指纹图谱,并对类方中的主要活性成分小檗碱、巴马汀、药根碱、黄连碱、表小檗碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱等的含量进行了测定。结果表明类方之间指纹图谱的相似度依次降低。主要生物碱的每克溶出率并没有随着类方中黄连比例的减少、吴茱萸比例的增加,呈相同比例的减少或增加。 (2)左金丸及类方的体外溶出行为研究。结果表明左金丸、甘露散、茱萸丸、反左金丸中小檗碱、巴马汀、药根碱在pH=1.2的盐酸溶液中3h的溶出量存在显著差异。随着类方配伍中黄连剂量的减少,吴茱萸剂量的增加,类方中3种生物碱的溶出量不断减少,但黄连和吴茱萸主要生物碱的溶出率并没有呈等比例的减少或增加。其中,3种生物碱溶出量顺序为:左金丸>甘露散>茱萸丸>反左金丸。 4.综合分析:采用SAS 8.0软件对左金丸及其类方作用于不同生物模型的热力学参数以及常规药理实验的特异性指标与UPLC化学指纹图谱中的特征共有吸收峰进行典型相关分析,以此评价左金丸及其类方之间活性差异的主要物质基础。结果表明:主要活性成分小檗碱、巴马汀、药根碱、表小檗碱、黄连碱可能是影响类方之间活性差异的主要因素。 根据上述研究结果,本文从微观和宏观两个角度定性且定量地考察了左金丸、甘露散、茱萸丸、反左金丸的活性差异,同时对其进行了化学定性定量分析,采用多元统计方法对影响四个复方活性差异的可能物质基础进行了初步地探讨。从不同层面,不同角度地表征了左金丸及其类方的客观差异,验证了类方之间客观差异的真实性。……   
[关键词]:左金丸及其类方;性效差异;物质基础;生物热动力学
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:成都中医药大学2011年