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柑橘衰退病毒在褐色橘蚜体内分布的初步研究

李文财

  西南大学硕士学位论文摘要 柑橘衰退病是由柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus, CTV)引起的一种严重威胁世界柑橘产业的重要病毒病害,该病毒主要通过蚜虫和嫁接传播。我国广泛分布着CTV的各种株系和强力传播媒介褐色橘蚜(Toxoptera citricida Kirkaldy)。随着近年来我国柑橘产业结构的调整,柚类、甜橙和杂柑的种植比例加大,造成茎陷点型衰退病在柚类和某些甜橙上的为害日益严重,逐渐成为柑橘生产中的突出问题。国外实践经验证明,在CTV强毒株和褐色橘蚜共存的地区,弱毒株交叉保护技术(Mild strain cross-protection MSCP)是防治柑橘茎陷点型衰退病最有效的方法。但是随着褐色橘蚜发生面积的不断扩大,外来CTV茎陷点型强毒株已入侵到南美洲的委内瑞拉、中美洲、和北美洲的美国加州、德克萨斯州等地,对当地正在进行的弱毒株系交叉保护造成了极大威胁,因此研究褐色橘蚜传播CTV的机理对防治柑橘衰退病具有极其重要的意义。 目前关于褐色橘蚜传播CTV的机理仍不清楚,先前的研究已证明,虫态、寄主类型、毒源构成以及环境条件都会对其传毒效率造成影响。近年的研究还显示,褐色橘蚜取食CTV后,单头蚜虫的带毒率很高,且传毒能力高的CTV分离株在褐色橘蚜体内的含量远高于中等和低传毒能力的CTV分离株在褐色橘蚜体内的含量。但是目前还未开展CTV在褐色橘蚜体内各组织中分布的研究,因此本研究在比较了6个不同CTV分离株蚜传能力的基础上,运用反转录巢式聚合酶链式反应(Reverse transcription-Nested-polymerase chain reaction, RT-Nested-PCR)技术对单头褐色橘蚜的带毒率,以及褐色橘蚜口针、头部和腹部的带毒情况进行了检测,同时运用免疫荧光标记技术对褐色橘蚜体内CTV进行了荧光定位标记。本研究为今后进行褐色橘蚜传毒机理的进一步研究提供了基础。 主要研究成果: 1.CTV强毒株CT3、CT30和立10-2,以及弱毒株CT77、141-4和立8-4的单蚜传毒率分别为6.25%、47.5%、10%、7.5%、31.25%和0%。褐色橘蚜对CTV强弱毒株的传毒率不存在明显的相关性; 2.褐色橘蚜取食不同传毒能力的4个CTV分离株后,其单蚜带毒率为76.25%90%,均高于各自的单蚜传毒率; 3.褐色橘蚜取食高传毒率的CT30和低传毒率的CT77后,其口针、头部和腹部CTV的带毒率差异不明显;并且褐色橘蚜口针中CTV的带毒率最高,其次为头部、腹部; 4.将褐色橘蚜口针进行CTV免疫荧光抗体标记后发现,CTV在蚜虫口针中的分布不均匀,在蚜虫的口针尖端或中部存在绿色荧光标记; 5.将褐色橘蚜整虫包埋后,进行半薄切片并免疫荧光标记,未能在褐色橘蚜头部发现绿色荧光标记物。……   
[关键词]:柑橘衰退病毒;褐色橘蚜;RT-Nested-PCR;荧光标记定位
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:西南大学2011年