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继代培养对球孢白僵菌毒力及毒力相关酶表达的影响

孙召朋

  对球孢白僵菌D6-2和L1-1菌株进行室内培养基继代培养,比较其不同世代之间在萌发率、毒力、毒素产生水平及毒力相关酶基因表达之间的差异。结果表明,两株供试菌株的F2代萌发率最高,分别达到了77%和70%,F1代略低于F2代,F2-F5代依次降低。室内杀亚洲玉米螟幼虫生物测定实验结果表明,在107孢子/ml供试浓度下,两个供试菌株D6-2和L1-1随着世代的更替,F2代相比于Fl代,其致死中时间LT50和90%死亡LT90所需时间降低,说明其对玉米螟的毒力有所增强。而两个供试菌株F2-F5代,其致死中时间LT50和90%死亡所需时间LT90逐渐增加,说明其对玉米螟的毒力呈下降趋势。两株供试白僵菌代谢产物分析结果表明, F1代均检测出了2-氯杀鼠灵酮,而F2-F5代未检测到,并且所有世代均未检测到其他两种待测毒素间甲基苯甲酸甲酯和对甲基苯甲酸甲酯。为了明确继代培养对球孢白僵菌毒力相关酶基因表达情况的影响,以18s rRNA基因为内参,利用半定量RT-PCR对体壁蛋白酶水解酶基因(BbCDEP1)和几丁质酶基因(BbChit1)的表达情况进行了检测。在内参基因稳定表达,也就是总RNA量相同的情况下,两个供试菌株D6-2和L1-1的BbCDEP1基因和BbChit1基因在F1和F2代表达稳定,随着继代次数的增多,供试菌株两个基因的表达量均呈下降趋势,这与对亚洲玉米螟毒力测试的结果呈正相关性。……   
[关键词]:球孢白僵菌;继代培养;毒力;毒素;毒力相关酶基因;半定量RT-PCR
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:吉林大学2011年
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