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枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)活性物质的分离和功能测定

周翠

  林果病害是一类重要的生物灾害,生物防治作为是林果病害管理中的一种有效持续控制方法,是现代林业重大生物灾害可持续控制系统中的重要组成部分。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是一种重要的生防内生菌。本研究从石榴果实中分离获得一株内生菌-枯草芽孢杆菌sdau08-96菌株,研究结果表明该菌对多种林果病原菌有明显的抑制作用。本研究通过对最佳发酵条件,抗菌物质的理化性质、分离纯化及功能测定,初步探讨了枯草芽孢杆菌sdau08-96菌株生防机理,为该菌的开发利用提供依据,主要结果如下: 1.产生抗菌物质的最佳培养基为LB培养基,装液量为100/250mL,初始pH值为7.0、温度28℃、接种量10%、培养时间72h和转速200r/m时菌体生长良好,产生的抗菌物质较多,抑菌活性高。 2.抗菌谱测定表明,sdau08-96菌株产生的抗菌蛋白和挥发性物质对多种病原菌都有较强的抑制作用,菌丝形态的变化相差不多,主要表现为,菌丝分支增多,扭曲,部分菌丝细胞出现断裂和原生质浓缩现象,菌丝顶端和中部细胞膨大成球形或椭圆形,部分菌丝变粗或纤细。抗菌蛋白较耐高温、耐盐、耐有机溶剂、耐酸碱性较好,挥发性物质还可抑制病原菌菌丝色素产生的速度。 3.抗菌蛋白的分离采用的方法为SDS-PAGE电泳找出胞外目的蛋白条带,切下条带测序,比对结果显示,胞外蛋白A条带与枯草芽孢杆菌膜关联的蛋白激酶的覆盖率为19%,胞外蛋白B条带与枯草芽孢杆菌脂蛋白的覆盖率为25%,可以断定A、B条带为目的蛋白条带。 4.挥发性物质的分离纯化采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用技术(HS-SPME-GC-MS)进行,经过GC-MS分析,挥发性活性物质共有21种不同组分,这些物质分属于烷烃、醇、酸、酯、酚和醛等几类物质。 5.挥发性活性物质组分的功能测定结果表明,十五烷、二苯并呋喃、邻苯二甲酸二乙酯、十四酸、2-丙烯酸十四烷酯和三聚乙醛6种物质的抑菌作用比较高,其中,二苯并呋喃和三聚乙醛的抑菌率可以高达80%;十四烷、4-羟基丁基丙烯酸酯、月桂醇、月桂酸、十六烷酸和硬脂酸6种物质的抑菌作用在20%以下或基本没有抑菌作用。……   
[关键词]:枯草芽孢杆菌sdau08-96;发酵条件;活性物质;分离;功能测定
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:山东农业大学2011年