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体外构建一种新型可注射组织工程髓核的初步实验研究

马健

  【目的】 1.通过观察富含血小板血浆(Platelet-rich plasma,PRP)凝胶的超微结构,探讨其生物学特性及作为支架材料构建可注射组织工程髓核的可行性。2.探讨以自体富含血小板血浆(PRP)凝胶支架复合兔脂肪间充质干细胞(ADSCs)构建可注射组织工程髓核的可行性。 【方法】 1.采用二次离心法制备PRP凝胶20例,分别采用全自动血细胞分析仪对全血和PRP行PLT计数并用酶联免疫吸附法测定全血和PRP凝胶中TGF-β1及PDGF-AB的浓度;同时,对PRP凝胶行大体观察、HE染色、透射及扫描电镜观察。2.将体外扩增的第3代兔脂肪间充质干细胞经流式细胞仪鉴定后接种至富含血小板血浆凝胶支架中体外立体培养。2周、4周、8周时分别行大体观察,组织学染色及蛋白多糖定量检测;BrdU(5-溴-2-脱氧尿嘧啶)免疫荧光法观察细胞在PRP支架中的存活情况;实时荧光定量PCR法检测HIF-1α、蛋白多糖、ColⅡ基因表达情况。 【结果】 1.PRP中的血小板(PLT)数量达到全血的4.58倍左右;PRP凝胶中含有高浓度的TGF-β1,PDGF-AB;扫描电镜及透射电镜观察均显示PRP凝胶主要由大量纤维蛋白网和血小板构成。2.流式细胞仪检测显示脂肪干细胞表面标记物CD90,CD105的阳性率分别为95.2%和97.4%,而CD45,CD34的阳性率分别为0.9%和1.4%。番红O染色及糖胺聚糖定量检测显示细胞具有分泌ECM的功能,并提示培养4周时糖胺聚糖含量较培养2周时明显增高(P<0.05),8周时较4周时明显增高(P<0.05);HE染色和扫描电镜可见细胞均匀分布于网络状支架表面;BrdU免疫荧光法显示细胞在支架中生存状态良好,8周时仍可见多数活细胞;复合体培养4周时与培养2周时比较3个目的基因mRNA表达量均增高,有显著性差异(P<0.05),8周时与4周时比较亦明显增高(P<0.05)。 【结论】 富含血小板血浆凝胶(PRP)具有良好的组织工程支架材料特性,富含血小板血浆凝胶支架与脂肪干细胞共培养后,可诱导脂肪干细胞向类髓核样细胞分化,提示富含血小板血浆凝胶可能是构建可注射组织工程髓核较为理想的一种支架材料。……   
[关键词]:富含血小板血浆凝胶;脂肪间充质干细胞;组织工程;髓核;
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:山西医科大学2011年