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胰岛素样生长因子-1对rhBMP-2诱导下成纤维细胞增殖及成骨转化的影响

管涛

  目的:观察胰岛素样生长因子-1(IGF-Ⅰ)在重组人骨形成蛋白2(rhBMP-2)诱导成纤维细胞(Fb)转化为成骨细胞中的影响,探讨IGF-Ⅰ对Fb在体外诱导成骨的过程中是否具有促进作用。 方法:Fb来源于成年新西兰大白兔(由山西医科大学实验动物中心提供)。分离、纯化提取成纤维细胞,然后培养。将细胞分为:空白对照组、rhBMP-2干预组和IGF-Ⅰ+rhBMP-2干预组。空白对照组:常规培养液培养,不加入任何诱导剂及干预因子;rhBMP-2干预组:常规培养液中加入100ng/ml的rhBMP-2;IGF-Ⅰ+rhBMP-2干预组:常规培养液中加入100ng/ml的rhBMP-2与终浓度为50ng/ml的IGF-Ⅰ。定期在倒置显微镜下观察Fb生长状况,并采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,同时行碱性磷酸酶(ALP)活性检测、茜素红染色及钙钴染色评价其成骨分化的能力。 结果: 1.与其它两组相比,IGF-Ⅰ+rhBMP-2组细胞增殖速度快,周期短,MTT法检测,细胞生长旺盛(P<0.05),而空白对照组与rhBMP-2干预组之间无统计学差异(P>0.05)。 2.rhBMP-2干预组ALP表达高于空白对照组(P<0.01);而IGF-Ⅰ+rhBMP-2组ALP表达明显高于其它2组,差异有统计学意义(P<0.01)。 3.茜素红染色空白对照组未见明显钙化结节,rhBMP-2干预组细胞可见红色钙化结节,而IGF-Ⅰ+rhBMP-2组钙化结节数目明显较成骨诱导对照组多,面积增大。 4.钙钴染色:rhBMP-2干预组和IGF-Ⅰ+rhBMP-2干预组细胞胞浆中均可见浅棕色至棕黑色的细胞颗粒。但以IGF-Ⅰ+rhBMP-2干预组棕黑色颗粒较多。空白对照组未见明显阳性细胞。 结论: 1.Fb在体外一定条件下经过诱导剂诱导后,可向成骨细胞方向转化。 2.IGF-Ⅰ可以促进Fb在rhBMP-2诱导下的增殖。 3.IGF-Ⅰ可以促进Fb在rhBMP-2诱导下成骨表型表达。……   
[关键词]:成纤维细胞;胰岛素生长因子-1;重组人骨形成蛋白-2;成骨转化;细胞增殖
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:山西医科大学2011年