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苯吡啶缩氨基硫脲合锌的抗肿瘤作用及机制研究

范红义

  目的:探讨并研究苯吡啶缩氨基硫脲合锌诱导人慢性粒细胞性白血病细胞株K562细胞凋亡及其可能的机制。 方法:运用不同浓度的苯吡啶缩氨基硫脲合锌(0.1,1,10, 30,50μM)对K562细胞进行损伤,通过MTT法、台盼蓝拒染法观察苯吡啶缩氨基硫脲合锌对K562细胞株体外增殖的抑制作用。采用吖啶橙染色和高内涵活细胞成像系统(Arrary Scan,VTIHCS 600型高内涵活细胞成像系统,美国Thermo公司),观察K562细胞凋亡形态;采用PI/hochest33342双染法和高内涵活细胞成像系统观察K562细胞凋亡形态;采用高内涵活细胞成像系统结合Rh123检测细胞线粒体膜电位的水平变化,并用钙离子敏感的荧光探针Fura-2/AM检测细胞内游离Ca~(2+)浓度进一步研究苯吡啶缩氨基硫脲合锌的钙协同作用,从细胞水平探讨苯吡啶缩氨基硫脲合锌诱导K562细胞凋亡的机制。 结果:1,浓度为0.1,1,10,30,50μM的苯吡啶缩氨基硫脲合锌与K562细胞共同孵育可造成损伤,且呈浓度依赖性,而浓度为0.1μM的苯吡啶缩氨基硫脲合锌可明显改善细胞形态,显著抑制K562细胞的存活率。2,苯吡啶缩氨基硫脲合锌与K562细胞共同孵育48小时可以显著损伤细胞,其IC_(50)为13.93μM,通过台盼蓝拒染实验可以确定其具有时间依赖性,表明苯吡啶缩氨基硫脲合锌对K562细胞生长呈现抑制作用。3,AO/EB染色法观察细胞的形态学表明,苯吡啶缩氨基硫脲合锌可以促进K562细胞凋亡,出现明显的凋亡形态学特征;通过测定细胞内荧光染料PI和hochest33342的荧光强度可以反映细胞损伤以及坏死的程度;通过测定细胞内荧光染料罗丹明123(Rh123)的荧光强度反映细胞线粒体膜电位的变化,不同浓度的苯吡啶缩氨基硫脲合锌可显著抑制K562细胞的线粒体膜电位水平的降低;通过检测K562细胞内游离Ca~(2+)浓度的变化表明苯吡啶缩氨基硫脲合锌可显著引发K562细胞内Ca~(2+)超载。 结论:新型化合物BT-zinc可引起人白血病K562细胞显著的损伤和凋亡,同时BT-zinc对K562细胞的抑制作用呈现明显的浓度依赖性和时间依赖性,效果强于同等浓度的顺铂。苯吡啶缩氨基硫脲合锌可能在抗肿瘤药物中具有潜在的应用价值。……   
[关键词]:苯吡啶缩氨基硫脲合锌;K562细胞;抗肿瘤;凋亡
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:河南大学2011年